武漢外泌體蛋白檢測(cè)

分離外泌體的方法之降水：它是一種基于生物體液中外泌體的電荷沉淀的方法。帶負(fù)電荷的外泌體可以與PEG35,000Da基質(zhì)中帶正電荷的魚(yú)精蛋白相互作用并形成沉淀。外泌體的回收和重懸比基于超速離心的分離更有效。聚合物沉淀法以更少的勞動(dòng)力和昂貴的設(shè)備分離尿外泌體的潛在益處。該方法首先利用DL-二硫蘇糖醇溶液還原或去除Tamm-Horsfall蛋白的聚合網(wǎng)絡(luò)，然后在25°C和30min下只用10,000×g的向心力即可實(shí)現(xiàn)外泌體的沉淀。還有利用聚合物沉淀方法并消除超速離心的商業(yè)試劑盒。ExoQuick?、Exo-spin?是來(lái)自Invitrogen?和miRCURY?的市售總外泌體分離試劑?？蓪⒉煌蛛x方法結(jié)合使用，以提高外泌體分離的效率和分離精度。武漢外泌體蛋白檢測(cè)

外泌體的表征分析：Zeta電位：通過(guò)電泳光散射(ELS)測(cè)量的Zeta電位測(cè)量粒子在電泳場(chǎng)中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(biāo)（非常值）和囊泡表面電荷的量度（+或-符號(hào)）。電子顯微鏡分析：對(duì)于電子顯微鏡分析，外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋，隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網(wǎng)格上，并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液（2%水溶液）中進(jìn)行對(duì)比，并在電子顯微鏡（Jeol1230TEM）下觀察，加速電壓為80kV，并連接到數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行觀察。武漢肺泡外泌體分離哪家好外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系復(fù)雜，通過(guò)在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移，參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機(jī)制的形成。

外泌體分離方法之密度梯度離心法：這種方法將超速離心機(jī)的超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合。具體地說(shuō)，密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒（例如蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/RNA聚集體）分離。因此，該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時(shí)間比較重要，否則如果外泌體部分具有相似的密度，則仍可能在外泌體部分中發(fā)現(xiàn)污染顆粒。該結(jié)構(gòu)不會(huì)讓大于1μm的細(xì)胞和其他顆粒進(jìn)入布線區(qū)域。一些較小的顆粒和細(xì)胞碎片可以進(jìn)入微柱區(qū)域，但被納米纖毛排除，形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結(jié)構(gòu)選擇性地捕獲外泌體和小細(xì)胞外囊泡。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長(zhǎng)度在20到22個(gè)核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護(hù)miRNA，防止其生物分子在非生理?xiàng)l件下（多次凍融循環(huán)、長(zhǎng)期儲(chǔ)存和極端pH）降解。據(jù)報(bào)道，外泌體來(lái)源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)5年，并且對(duì)凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標(biāo)志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，并且還被證明被遠(yuǎn)端或附近的受體細(xì)胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細(xì)胞間通訊的一種方法，可能會(huì)影響發(fā)病機(jī)制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)受體細(xì)胞的載體。外泌體作為一種重要的細(xì)胞通訊方式，在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有普遍的應(yīng)用前景。

對(duì)于外泌體的標(biāo)記和鑒定，獲得外泌體之后，如何對(duì)其進(jìn)行鑒定又是一個(gè)困擾研究者的問(wèn)題。國(guó)際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(ISEV)在2014年提議，對(duì)于分離獲得的外泌體需要從三個(gè)層面進(jìn)行鑒定：WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白表達(dá)情況：外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)目缒さ鞍准易?CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細(xì)胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標(biāo)志物。TEM鑒定外泌體形態(tài)：電鏡具有較高的分辨率，可以直接觀察到樣品中外泌體的形態(tài)。NTA檢測(cè)外泌體粒徑及濃度：TEM可以觀察外泌體的形態(tài)學(xué)特征，但無(wú)法體現(xiàn)樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術(shù)可快速準(zhǔn)確地分析外泌體的粒徑分布及濃度，為外泌體鑒定提供有力證據(jù)。外泌體來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)各種類型的囊泡，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細(xì)胞膜等。武漢血漿外泌體公司

外泌體可以傳遞生物分子，例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等，影響接收器細(xì)胞的表現(xiàn)型和生理活性。武漢外泌體蛋白檢測(cè)

外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測(cè)方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測(cè)定，而ELISA檢測(cè)提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測(cè)和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測(cè)特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。武漢外泌體蛋白檢測(cè)

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