外泌體的構(gòu)成：除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源)、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶（烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環(huán)素A,FASN,MDH1和CNP）、核糖體蛋白（RPS3）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細(xì)胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子（MFGE8、整合素）、細(xì)胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體來源于細(xì)胞內(nèi)各種類型的囊泡，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細(xì)胞膜等。重慶外泌體芯片檢測
什么是外泌體？外泌體的作用。簡單來說，它就是我們皮膚肌底細(xì)胞的分泌物，但是這個分泌物是除了細(xì)胞核外，把其他所有的營養(yǎng)物質(zhì)都能涵蓋，所以它是取之于人類細(xì)胞用之于人類細(xì)胞，成分安全。外泌體不是干細(xì)胞，是干細(xì)胞較精華的部分，生物**為了獲取外泌體囊泡，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進行分離、純化、培養(yǎng)、增殖等一系列復(fù)雜先進工藝制備而成的外泌體混懸液，他是干細(xì)胞得以存活的精華，細(xì)胞是靠它生長的，**對干細(xì)胞的獲取很容易的，但外泌體就比較難了，全球醫(yī)學(xué)**都在為研究外泌體的醫(yī)學(xué)應(yīng)用而付出努力，目前只有少數(shù)國家的細(xì)胞庫能夠成功獲取這一成果，其含有許多信號蛋白，核糖核酸，細(xì)胞生命DNA的密碼，一個細(xì)胞里95%是水，還有5%就是外泌體成分，其復(fù)雜特殊性比干細(xì)胞的培養(yǎng)時間長四五倍，精貴了一百倍他是干細(xì)胞的精華部分，保證了“干細(xì)胞”的所有功能并且具備干細(xì)胞未具備的功能———它能準(zhǔn)時抵達指定位置及時準(zhǔn)確治著替代衰老病變細(xì)胞。鄭州細(xì)胞外泌體哪家好分離過程中避免對外泌體結(jié)構(gòu)和功能造成影響至關(guān)重要。
細(xì)胞外泌體的來源和表征方法：細(xì)胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過去的20年里，科學(xué)家已經(jīng)從包括正常細(xì)胞和病細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中分離出外泌體，并且研究了它們對其他細(xì)胞的影響。外泌體是由多種大分子組成，例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細(xì)胞外泌體具有天然的特定細(xì)胞靶向特性，通常被設(shè)計用于靶向大分子（DNA和RNA）和藥物遞送系統(tǒng)（多柔比星、紫杉醇和紫杉醇）。目前常用細(xì)胞外泌體的分離方法主要是超速離心法、密度梯度離心法、超濾分離法、基于聚合物的沉淀法、親和沉淀分離法、免疫磁珠法和色譜法等。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。外泌體通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)和疙瘩微環(huán)境，在疙瘩免疫治著中的作用日益受到關(guān)注。
外泌體的物理表征方法：常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法，例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡；動態(tài)光散射；納米粒子跟蹤分析；可調(diào)電阻脈沖傳感；和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括：實時定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)（基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代測序）、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系復(fù)雜，通過在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移，參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機制的形成。鄭州細(xì)胞外泌體哪家好
外泌體與生物體的免疫應(yīng)答密切相關(guān)，通過它們攜帶的抗原和免疫調(diào)節(jié)分子對免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用。重慶外泌體芯片檢測
差速離心法分離外泌體的實驗原理：離心管內(nèi)粒子的速度，由三種力（離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力）的平衡決定，如：其中g(shù)eff為離心力（加速度），R為旋轉(zhuǎn)半徑，即粒子距旋轉(zhuǎn)軸的距離，ω為旋轉(zhuǎn)角頻率，d為粒子直徑，ρ為質(zhì)量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質(zhì)的密度和粘度。在固定的離心條件（轉(zhuǎn)速和介質(zhì)成分）下，粒子速度完全由粒子的形態(tài)和密度決定。密度高于介質(zhì)密度的粒子沿離心力“向下”運動，而比介質(zhì)輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對于相似的密度，較大的粒子遷移得更快。因此，在生物學(xué)中，離心主要用于按大小（差速和速率區(qū)帶離心）或按密度（等密度離心）分離不同的物體。在這項研究中，我們專注于使用差速離心按大小進行顆粒分級。重慶外泌體芯片檢測
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