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PCR(PolymeraseChainReaction)是一種復(fù)制核酸片段并提高DNA產(chǎn)量的技術(shù),即所謂的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),這種技術(shù)可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)大量復(fù)制特定的基因片段。由于其高敏感性和高特異性的特點(diǎn),PCR技術(shù)被應(yīng)用在寵物疾病分子的診斷上,將從疑似患病寵物(血液、眼鼻分泌物、糞便,尿液或腹水)中采樣的極微量病原(細(xì)菌、病毒或寄生蟲(chóng))特定核酸片段樣本,透過(guò)PCR的方式大量被復(fù)制,再以核酸電泳的方式判讀結(jié)果,從而獲得早期、快速、穩(wěn)定和準(zhǔn)確的診斷結(jié)果.巧亦捷全自動(dòng)核酸檢測(cè)一體已實(shí)現(xiàn)覆蓋貓、犬腸道類、呼吸道類、血液類、人畜共患類等多種病原體的診斷。江蘇熒光PCR
PCR技術(shù)是從DNA水平對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè),將病原DNA進(jìn)行大量的擴(kuò)增,在通過(guò)多種途徑對(duì)擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),膠體金檢測(cè)方法雖然快速、便捷的,但是該種方法是從蛋白水平對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè),故存在一定的交叉反應(yīng)和動(dòng)物自身抗體干擾,導(dǎo)致臨床應(yīng)用的過(guò)程中出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性的結(jié)果,巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用的PCR技術(shù)從根本上避免了檢測(cè)呈現(xiàn)假陽(yáng)性或弱陽(yáng)性的結(jié)果,極大提高了檢測(cè)的靈敏性和特異性。此外,利用PCR引物的高度特異性,可以排除其他所有非致病原體的干擾,實(shí)現(xiàn)精確的診斷,與其他檢測(cè)方法相比具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。江蘇熒光PCRPCR是可以做到病原體準(zhǔn)確診斷的技術(shù),與膠體金試紙及熒光定量試紙的應(yīng)用場(chǎng)景相同。
巧亦捷核酸一體機(jī)采用的TaqMan探針?lè)ń榻B:TaqMan探針?lè)ㄊ蔷哂懈叨忍禺愋缘亩縋CR技術(shù)。它的工作原理是在PCR反應(yīng)體系中存在一對(duì)PCR引物和一條探針,探針的5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán),3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán),探針只與模板特異結(jié)合,其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時(shí)候,報(bào)告基團(tuán)的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收,所以儀器搜集不到信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)展,Taq酶遇到探針,利用3′→5′外切核酸酶的活性把探針切斷,導(dǎo)致報(bào)告基團(tuán)的熒光能量不能被淬滅基團(tuán)吸收,產(chǎn)生了熒光信號(hào),因此信號(hào)的強(qiáng)度就代、表了模板DNA的拷貝數(shù)。
寵物是我們的家人,每一個(gè)飼主都希望能夠給自己的寶貝比較好的照顧,特別是當(dāng)他們生病的時(shí)候。每一位醫(yī)生也都希望能夠在**短的時(shí)間內(nèi)找到病因,對(duì)癥下藥,以減少動(dòng)物的痛苦,盡早痊愈。只是可惜的是,市面上現(xiàn)有的一些PCR儀器因?yàn)橐韵碌脑?,無(wú)法在寵物的健康照顧上發(fā)揮比較大的功用:1、設(shè)備昂貴2、操作過(guò)程需要專業(yè)人員3、需要大空間放置所有設(shè)備4、PCR檢測(cè)系統(tǒng)(配置PCR試劑體系+PCR儀擴(kuò)增+瓊脂糖凝膠電泳制備+凝膠成像系統(tǒng))(**少4個(gè)小時(shí)的實(shí)驗(yàn)時(shí)間),所以相較于PCR儀器,寵物醫(yī)院更適合購(gòu)買一臺(tái)全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)一體機(jī)。PCR檢測(cè)普及率越來(lái)越高,PCR檢測(cè)正處于高速發(fā)展階段,未來(lái)寵物PCR檢測(cè)市場(chǎng)前景良好。
巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針?lè)晒釶CR與常規(guī)PCR的不同之處在于:在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針(探針本身具有熒光標(biāo)記),該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計(jì)因此只能與待檢測(cè)序列結(jié)合,與染料法相比提高了實(shí)驗(yàn)的特異性。目前市場(chǎng)上的探針主要種類有:TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等,其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu):長(zhǎng)度與普通PCR引物類似,大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個(gè)熒光基團(tuán),5’的熒光基團(tuán)稱為報(bào)告基團(tuán)(Report),3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)(Quencher)。TaqMan探針的性能:在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長(zhǎng)激發(fā)報(bào)告基團(tuán),由于報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近,因此報(bào)告基團(tuán)能夠通過(guò)FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán),使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量,而報(bào)告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。PCR技術(shù)又可以分為定量PCR和常規(guī)PCR,定量PCR分為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)和數(shù)字PCR。江蘇熒光PCR
目前對(duì)傳染性疾病更先進(jìn),準(zhǔn)確性更高,臨床價(jià)值更大的是PCR?檢測(cè)方法,也是目前國(guó)外普遍采用的檢測(cè)方法。江蘇熒光PCR
巧亦捷全自動(dòng)薄膜微流控核酸檢測(cè)儀器擁有多種重技術(shù),保障結(jié)果準(zhǔn)確:其采用Taqman熒光探針和經(jīng)典PCR擴(kuò)增技術(shù),能夠?qū)⑸飿?biāo)志物精確定量,同時(shí)輸出Ct值和擴(kuò)增曲線,結(jié)果判讀簡(jiǎn)潔明了;質(zhì)控更全1面,結(jié)果更可靠,設(shè)備體積小巧,便于搬運(yùn)和攜帶,可在多種場(chǎng)景下隨心使用,且薄膜微流控芯片為封閉系統(tǒng)操作,可很大程度避免人為和環(huán)境的污染,降低對(duì)檢測(cè)環(huán)境的要求,以及對(duì)檢測(cè)人員的要求。更適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場(chǎng)等多種使用場(chǎng)景。江蘇熒光PCR