相對于Smart-Seq技術(shù)在細胞數(shù)量上的問題，10X平臺普遍提供的細胞數(shù)量都在1000-20000不等的測序細胞量，這個量級的測序細胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此，這兩種技術(shù)對于基于基因表達進行準確細胞分型上，無論是從細胞數(shù)量上來說還是表達檢測可靠性來說，都會更實用。同時依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說，影響幾乎可以忽略不計（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果，顯示無影響。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次突破性的改變，一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定。上海10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析培訓班
科研的魅力之處，在于無窮盡的探尋生命的本底，通過單細胞測序，我們對組織的分子基礎(chǔ)的研究也從初級到深層，并在單細胞層面逐漸達成一致，那么不禁要問一句，組織的空間位置到底重不重要？空間異質(zhì)性是功能的關(guān)鍵特征，細胞的位置信息更能反應細胞命運調(diào)控機制和細胞譜系發(fā)生過程。因此時間和空間即像組織的AB面，而不可否認的是，此時空間坐標的記錄，像一個還未長大的娃娃，雖未觸及分子基礎(chǔ)研究的深層，但仍在努力攀登探尋生命本底的下一個高峰。重慶10X Chromium X單細胞測序服務機構(gòu)烈冰生物為您提供多平臺一站式全流程單細胞測序服務。
關(guān)于單細胞測序?qū)嶒灅颖局苽?，這與流式細胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對樣本進行染色，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質(zhì)量的單細胞懸液。
作為單細胞測序的一個重要里程碑，10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution，此平臺整合了儀器、試劑盒和信息學軟件，能精確對接illumina測序儀，因此可實現(xiàn)大量大細胞的快速高效標記、測序和分析，獲得單細胞水平的基因表達譜和差異情況，并通過對復雜細胞群體進行深入細致分析，繪制大規(guī)模單細胞表達圖譜。 以量化細胞內(nèi)的群體異質(zhì)性，并逐個鑒定細胞類型、細胞狀態(tài)和動態(tài)細胞躍遷。除了有望鑒定新的細胞亞型和稀有細胞群體，單細胞技術(shù)還能更好地了解轉(zhuǎn)錄動態(tài)和基因調(diào)控關(guān)系。經(jīng)驗豐富的實驗團隊，為獲得示組織內(nèi)真實表達水平的高質(zhì)量冷凍切片提供硬件和技術(shù)保障。
Single Cell Sequencing技術(shù)，即利用優(yōu)化后的高通量測序技術(shù)（NGS，Next Generation Sequencing）分析每一個單個細胞的序列信息，從而更高分辨率地揭示細胞間的細胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題來了，如何獲得單個細胞？如果無法獲得單個細胞這一切都是不成立的；如何獲得大批量的單個細胞？單個組織細胞群體通常在百萬級別以上，如果被檢測的測序細胞數(shù)量過小精確度不足；如何低成本地獲得大批量單個細胞？單細胞測序成本非常高，尤其是需要測2000~3000個以上的細胞的時候，如果單個細胞的分選成本也很高，技術(shù)根本無法普及。所以，正因為這些問題的存在使得高通量測序在單個細胞測序應用中的普及度一直不足，直到幾個突破性技術(shù)的誕生。附加流式分選細胞表面Marker，對于較低分辨率的標志物也能有效鑒定，助力高要求測序項目。上海10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析培訓班
烈冰一站式單細胞測序服務：立足科學研究，解碼生命本質(zhì)。上海10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析培訓班
樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對細胞進行清洗和計數(shù)后，單細胞懸液應當保存于冰上，直至用于后續(xù)的上機和文庫制備步驟。在理想狀況下，一旦制備好樣本，應當在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而，您還有必要了解各類細胞的不同性質(zhì)，因為這可能會影響細胞應在冰上保存的時間，以及它們在制備后多久便應當被盡快使用。例如，有些細胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時間，它們就開始形成團塊。這些團塊很難解離，增加了堵塞的風險，而且每個團塊被當成單細胞計數(shù)，又降低了細胞計數(shù)的準確性。此外，有些細胞更加粘稠，形成團塊的速度更快。對于這些細胞，必須盡量減少制備和使用之間的時間差。上海10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析培訓班
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