蘇州10X Genomics單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

來源: 發(fā)布時間:2022-08-08

針對單細(xì)胞測序的細(xì)胞上樣數(shù),為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好?一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時,如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000,上樣細(xì)胞懸液體積勢必增加,在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想(細(xì)胞活性5%、結(jié)團(tuán)率均>5%)的情況下,引入的背景信號會增加,分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括:cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fractionreadsincells偏低。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時,會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果!當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時,多細(xì)胞率會增加,數(shù)據(jù)分析時,此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍(N是一個GEM包裹的細(xì)胞數(shù)),導(dǎo)致所有細(xì)胞的統(tǒng)計數(shù)據(jù)(單個細(xì)胞基因檢測中位數(shù)、單個細(xì)胞UMI檢測中位數(shù))虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進(jìn)行過濾,但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細(xì)胞的人為去除!烈冰對于一個細(xì)胞群體中的每個細(xì)胞單獨進(jìn)行建庫測序分析。蘇州10X Genomics單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

單細(xì)胞測序?qū)嶒炘贅颖炯?xì)胞上機(jī)分選簽,需要對細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活性進(jìn)準(zhǔn)判斷,這對SingleCell分選標(biāo)記、建庫、下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細(xì)胞計數(shù)偏高,將會影響建庫的成功率;計數(shù)偏低,則會提高雙細(xì)胞的比例;而細(xì)胞活率過低,就會使測序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣,因此把好單細(xì)胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過程中,由于不同操作人員手法具有不可避免的差異,不同的液體流速將直接影響單細(xì)胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細(xì)胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器,其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式,來對應(yīng)各種不同的操作。通過已經(jīng)設(shè)定的程序來控制液體的流速,大幅度降低人為操作習(xí)慣帶來的差異,保證實驗操作的一致性。蘇州10X Chromium X單細(xì)胞測序服務(wù)公司烈冰引進(jìn)國際主流單細(xì)胞和空間轉(zhuǎn)錄組測序平臺,保障細(xì)胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細(xì)區(qū)域的空間信息。

機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激,其細(xì)胞會從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”;當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時,往往會經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,導(dǎo)致一些基因被沉默,一些基因被重新“喚醒”,但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的;scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時序分析,即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時間的變化情況,構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育,但這里的時間并不是真時間,而是一個虛擬的時間,是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中,也會存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此,不論測定了多少樣本,我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。

單細(xì)胞測序是指針對單個細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測序分析,可精確地描述每一個細(xì)胞的狀態(tài),在異質(zhì)性發(fā)育過程中具有特殊的應(yīng)用價值。然而,單細(xì)胞測序無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息,對于揭示發(fā)育過程、病理微環(huán)境都存在很大的局限性??臻g轉(zhuǎn)錄組測序以點陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測序,可以精確指示點陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況??臻g轉(zhuǎn)錄組測序的加入,無疑讓單細(xì)胞測序如虎添翼,更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測序平臺。

從單細(xì)胞測序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細(xì)胞類型的功能解析,越來越需要一種多組學(xué)的細(xì)胞生物學(xué)視角。通過單細(xì)胞多組學(xué)——即對不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個單細(xì)胞來源中檢測多種細(xì)胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)、免疫組庫序列(包括T細(xì)胞和B細(xì)胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個實驗可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時間)。烈冰科技成立10余年,為科研學(xué)者提供專注的測序數(shù)據(jù)分析服務(wù)。合肥10X單細(xì)胞測序

烈冰實驗室包含從樣本處理到測序下機(jī)的全套實驗平臺。蘇州10X Genomics單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù),深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學(xué)意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究,加速科研進(jìn)程!此外,烈冰生信團(tuán)隊根據(jù)豐富的實戰(zhàn)經(jīng)驗為用戶量身打造了一款單細(xì)胞測序結(jié)果解讀的神兵利器——單細(xì)胞瀏覽器(SingleCellBrowser),不但可以將海量復(fù)雜的結(jié)果文件可視化,還是可以實現(xiàn)三維立體化展示的軟件。專業(yè)的生信代碼交給專業(yè)的烈冰,專業(yè)的生物學(xué)意義交給專業(yè)的您!蘇州10X Genomics單細(xì)胞測序多組學(xué)測序

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