蘇州10X單細胞測序服務(wù)機構(gòu)

來源: 發(fā)布時間:2022-08-16

細胞中基因的表達是嚴格按照時間和空間順序發(fā)生,因此細胞類型和基因表達具有時間特異性和空間特異性。時間特異性可以通過收集不同時間點的樣本進行單細胞轉(zhuǎn)錄組測序來分析。但是單細胞轉(zhuǎn)錄組測序(scRNA-Seq)在單細胞懸液制備的過程中破壞了細胞的空間結(jié)構(gòu),無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個問題,其以點陣形式記錄組織切片細胞的空間信息,在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,獲得細胞/基因的空間表達特異性。十二年測序經(jīng)驗,累計服務(wù)與5000余項重要科研項目。蘇州10X單細胞測序服務(wù)機構(gòu)

單細胞測序龐大的數(shù)據(jù)烈冰生信團隊傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺,可實現(xiàn)零代碼操作、簡單方便:單細胞瀏覽器的操作簡單,不需要命令行操作。簡單拖拽、設(shè)置參數(shù)即可運行,即使生信0基礎(chǔ)用戶也可以運用自如;可視化展示海量結(jié)果文件:可視化展示Cluster的基因數(shù),UMI數(shù)量、線粒體RNA占比信息;以及不同Cluster對應(yīng)的細胞數(shù)量、基因表達量、RNA表達量、樣本細胞分布、線粒體RNA表達量等;3D立體展示,文章動圖先人一步:單細胞瀏覽器針對t-SNE圖、UMAP圖和pseudotime結(jié)果進行三維立體展示,更加直觀立體的觀察細胞分布和聚類情況。天津10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化烈冰引進國際主流單細胞和空間轉(zhuǎn)錄組測序平臺,保障細胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細區(qū)域的空間信息。

針對樣本活性的問題,10×Genomics官方建議當單細胞懸液活性低于70%時應(yīng)做去除死細胞操作,但也需要注意到,去除死細胞的操作會損失一定的細胞數(shù)量,10×Genomics和MiltenyiBiotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數(shù)量才建議做去除死細胞的操作?;诹冶嗄陠渭毎麥y序?qū)嶒灲?jīng)驗,建議當細胞懸液進行質(zhì)量和活性檢測后,考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液(小于30%),懸液中細胞大量死亡,可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細胞比例和狀態(tài),失真嚴重,建議重新收集樣本進行新的實驗,保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性。

關(guān)于單細胞測序?qū)嶒灅颖局苽?,這與流式細胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致,也就是通過酶促或機械消化、細胞分選或其他細胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟,以確保您的樣本有適當濃度的活細胞,并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要,您還可以使用抗體對樣本進行染色,標記細胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗?zāi)繕硕āR苍S需要額外的制備步驟,具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細胞大小,以及是否需要提取出細胞核進行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何,所有樣本類型都遵循同一個基本原則,那就是生成高質(zhì)量的單細胞懸液。烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表。

單細胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細胞水平上高通量測序分析基因表達譜的技術(shù),突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,組織解離后,單個樣本一次上機能捕獲500-20000個細胞,基于每個細胞分別建庫測序,獲得單個細胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達狀態(tài),并鑒定細胞的類型,可以在不同樣本間從細胞類型的組成和豐度角度進行比較,反映細胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺實現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細胞捕獲,系統(tǒng)實現(xiàn)16個通道同時運行,每個通道可捕獲2000-20000個細胞(不混樣),并支持原ChromiumController體統(tǒng)外的多種細胞捕獲百萬級別通量實驗,可準確鑒別稀有細胞類型和適配大規(guī)模單細胞研究。烈冰全線實驗平臺滿足超深度、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復雜疾病研究的測序。溫州上海烈冰單細胞測序

單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。蘇州10X單細胞測序服務(wù)機構(gòu)

針對單細胞測序的細胞上樣數(shù),為什么不建議捕獲到的細胞數(shù)量越高越好?一味地追求高數(shù)量的細胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機細胞懸液濃度固定時,如果目標細胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000,上樣細胞懸液體積勢必增加,在細胞懸液質(zhì)量不是很理想(細胞活性5%、結(jié)團率均>5%)的情況下,引入的背景信號會增加,分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括:cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fractionreadsincells偏低。當cell和non-cell無法有效區(qū)分時,會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果!當目標細胞捕獲數(shù)很大時,多細胞率會增加,數(shù)據(jù)分析時,此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍(N是一個GEM包裹的細胞數(shù)),導致所有細胞的統(tǒng)計數(shù)據(jù)(單個細胞基因檢測中位數(shù)、單個細胞UMI檢測中位數(shù))虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進行過濾,但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細胞的人為去除!蘇州10X單細胞測序服務(wù)機構(gòu)

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