空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個階段:1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分;2.Spot點陣的分群與定義;3.Spot分群的功能與生物學(xué)價值。每一個部分都不可或缺,其結(jié)果都對后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的,都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細(xì)胞的原始數(shù)據(jù)過濾策略即可,左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負(fù)荷。隨后,采用10X官方的Spatialranger的策略進(jìn)行后續(xù)分析,解析出位于空間位置中的有效的Spot表達(dá)矩陣。烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際主流期刊研究文章發(fā)表。寧波烈冰單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持
機體為響應(yīng)各種應(yīng)激,其細(xì)胞會從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”;當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時,往往會經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,導(dǎo)致一些基因被“沉默”,一些基因被重新“喚醒”,但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的;scRNA-seq擬時序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時序分析,即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時間的變化情況,構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育,但這里的時間并不是真時間,而是一個虛擬的時間,是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個樣本中,也會存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此,不論測定了多少樣本,我們都可以采用擬時序分析對樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。合肥BD Rhapsody單細(xì)胞多組學(xué)服務(wù)機構(gòu)單細(xì)胞技術(shù)從 2009 年發(fā)展到現(xiàn)在,研究范圍不再局限于轉(zhuǎn)錄組,擴展到了基因組、免疫組、蛋白組等多組學(xué)水平。
當(dāng)蜂巢孔內(nèi)同時落入細(xì)胞和磁珠后,接下去可以往BDCartridge板中加入細(xì)胞裂解液對細(xì)胞進(jìn)行裂解,使細(xì)胞內(nèi)的RNA與磁珠上的標(biāo)簽進(jìn)行結(jié)合,完成每個細(xì)胞內(nèi)RNA的捕獲和標(biāo)記。這時,再將捕獲了RNA的磁珠進(jìn)行回收,待所有質(zhì)控結(jié)果確認(rèn)通過后就可以進(jìn)行后續(xù)的RNA反轉(zhuǎn)錄、cDNA第二鏈合成等實驗操作。而BDCartridge板則需要再進(jìn)行一次成像,獲得磁珠收集后的掃描圖,判斷磁珠是否已經(jīng)被有效收集。根據(jù)每一步的質(zhì)控結(jié)果,烈冰科技(NovelBio)單細(xì)胞測序?qū)嶒瀳F(tuán)隊會根據(jù)單細(xì)胞分選的實驗結(jié)果生成實驗總結(jié)報告,判斷每一步驟是否通過質(zhì)控,并得到捕獲的單細(xì)胞數(shù)量以及雙細(xì)胞比例,對整個實驗進(jìn)行總結(jié)評估。若所有過程通過質(zhì)控,實驗樣本即可進(jìn)行下一步實驗操作。
從單細(xì)胞測序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細(xì)胞類型的功能解析,越來越需要一種多組學(xué)的細(xì)胞生物學(xué)視角。通過單細(xì)胞多組學(xué)——即對不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個單細(xì)胞來源中檢測多種細(xì)胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)、免疫組庫序列(包括T細(xì)胞和B細(xì)胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個實驗可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時間)。單細(xì)胞測序因其強大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系,一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù)已應(yīng)用于心肌再生領(lǐng)域。
烈冰生信團(tuán)隊傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺,可實現(xiàn)零代碼操作、簡單方便:單細(xì)胞瀏覽器的操作簡單,不需要命令行操作。簡單拖拽、設(shè)置參數(shù)即可運行,即使生信0基礎(chǔ)用戶也可以運用自如;可視化展示海量結(jié)果文件:可視化展示Cluster的基因數(shù),UMI數(shù)量、線粒體RNA占比信息;以及不同Cluster對應(yīng)的細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、RNA表達(dá)量、樣本細(xì)胞分布、線粒體RNA表達(dá)量等;3D立體展示,文章動圖先人一步:單細(xì)胞瀏覽器針對t-SNE圖、UMAP圖和pseudotime結(jié)果進(jìn)行三維立體展示,更加直觀立體的觀察細(xì)胞分布和聚類情況。烈冰智造PanoCell單細(xì)胞捕獲,媲美國際主流的單細(xì)胞平臺。蘇州single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)
目前單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)仍然處于技術(shù)探索及高通量開發(fā)階段,但應(yīng)用單細(xì)胞多組學(xué)分析是研究發(fā)展的必然趨勢。寧波烈冰單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持
單細(xì)胞技術(shù)讓我們在基因組學(xué)、表觀基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等層面上解析了許多錯綜復(fù)雜的生命密碼。隨著科技的進(jìn)步,我們發(fā)現(xiàn)整合多個組學(xué)的信息可以更仔細(xì)地觀察細(xì)胞之間的可變性,更清楚地識別特定細(xì)胞及其功能。單細(xì)胞多組學(xué)在臨床診斷、疾病分型以及細(xì)胞發(fā)展機制這些重大生命科學(xué)領(lǐng)域方面的應(yīng)用也將越來越廣。單細(xì)胞技術(shù)從 2009 年發(fā)展到現(xiàn)在,研究范圍不再局限于轉(zhuǎn)錄組,而是擴展到了基因組、免疫組、表觀組、蛋白組等多組學(xué)水平。寧波烈冰單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持
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