冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫(kù)構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過(guò)甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理，使細(xì)胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，從而獲取基因表達(dá)信息。總體來(lái)說(shuō)，空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫(kù)-上機(jī)測(cè)序，而需要客戶(hù)進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單：組織凍存與OCT包埋。目前已應(yīng)用的單細(xì)胞多組學(xué)聯(lián)合分析包括轉(zhuǎn)錄組和基因組，轉(zhuǎn)錄組和ＤＮＡ甲基化、轉(zhuǎn)錄組和蛋白組。上海scRNA單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
多樣本數(shù)據(jù)合并：FractionofReadsKept：合并樣本時(shí)，各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計(jì)算出來(lái)的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大，需要進(jìn)行Downsample處理，以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測(cè)序深度標(biāo)化到同一水平，從而避免因測(cè)序深度差異導(dǎo)致的基因檢測(cè)數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶(hù)定制化分析數(shù)據(jù)，深入解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果，深入挖掘其背后的生物學(xué)意義；從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究，加速科研進(jìn)程！成都scRNA單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)大多數(shù)以轉(zhuǎn)錄 組測(cè)序?yàn)橹攸c(diǎn)。
基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴(kuò)增成千上萬(wàn)倍，保證過(guò)程中足夠的測(cè)序深度。測(cè)序時(shí)使用特殊標(biāo)記的dNTP：1）堿基上通過(guò)敏感鍵修飾上不同的熒光基團(tuán)，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團(tuán)封閉，保證一次循環(huán)只上一個(gè)dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時(shí)，會(huì)通過(guò)高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團(tuán)和疊氮基團(tuán)，開(kāi)啟下一循環(huán)。通過(guò)分析讀取同一位點(diǎn)的熒光，實(shí)時(shí)獲取模版鏈的堿基序列。由于過(guò)程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會(huì)出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長(zhǎng)只能限制在200bp左右。
機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激，其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”；當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí)，往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組，導(dǎo)致一些基因被“沉默”，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們?cè)诓恍枰兓那闆r下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時(shí)序分析，即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況，構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育，但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間，而是一個(gè)虛擬的時(shí)間，是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個(gè)樣本中，也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此，不論測(cè)定了多少樣本，我們都可以采用擬時(shí)序分析對(duì)樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。
FluidigmC1平臺(tái)基于富魯達(dá)（Fluidigm®）的微流控技術(shù)應(yīng)用于單細(xì)胞測(cè)序（SingleCellRNASequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化中，該技術(shù)大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類(lèi)的Single-Cell測(cè)序建庫(kù)。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是，現(xiàn)在很多非RNA類(lèi)SingleCell測(cè)序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如SingleCellDNA-Seq，SingleCellATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫(kù)。所以可以說(shuō)，至少在10XGenomics、BD或者其他企業(yè)推出有效的SingleDNA測(cè)序技術(shù)之前，C1仍然會(huì)是市場(chǎng)上的重要組成部分。烈冰測(cè)序數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，不依賴(lài)已有物種信息，可研究非模式物種，針對(duì)不同平臺(tái)的數(shù)據(jù)，制定多套流程。上海烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)
烈冰測(cè)序服務(wù)已助力300余篇國(guó)際主流期刊研究文章發(fā)表。上海scRNA單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
單細(xì)胞測(cè)序是指針對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，可精確地描述每一個(gè)細(xì)胞的狀態(tài)，在異質(zhì)性發(fā)育過(guò)程中具有不可忽視的應(yīng)用價(jià)值。然而，單細(xì)胞測(cè)序無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息，對(duì)于揭示發(fā)育過(guò)程、病理微環(huán)境都存在很大的局限性?？臻g轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以點(diǎn)陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測(cè)序，可以精確指示點(diǎn)陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況?？臻g轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的加入，無(wú)疑讓單細(xì)胞測(cè)序如虎添翼，更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。上海scRNA單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家有著雄厚實(shí)力背景、信譽(yù)可靠、勵(lì)精圖治、展望未來(lái)、有夢(mèng)想有目標(biāo)，有組織有體系的公司，堅(jiān)持于帶領(lǐng)員工在未來(lái)的道路上大放光明，攜手共畫(huà)藍(lán)圖，在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康行業(yè)中積累了大批忠誠(chéng)的客戶(hù)粉絲源，也收獲了良好的用戶(hù)口碑，為公司的發(fā)展奠定的良好的行業(yè)基礎(chǔ)，也希望未來(lái)公司能成為*****，努力為行業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展奉獻(xiàn)出自己的一份力量，我們相信精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念以及自強(qiáng)不息，斗志昂揚(yáng)的的企業(yè)精神將**上海烈冰生物醫(yī)藥科技供應(yīng)和您一起攜手步入輝煌，共創(chuàng)佳績(jī)，一直以來(lái)，公司貫徹執(zhí)行科學(xué)管理、創(chuàng)新發(fā)展、誠(chéng)實(shí)守信的方針，員工精誠(chéng)努力，協(xié)同奮取，以品質(zhì)、服務(wù)來(lái)贏得市場(chǎng)，我們一直在路上！