細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時間和空間順序發(fā)生,因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時間特異性和空間特異性。時間特異性可以通過收集不同時間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序來分析。但是單細(xì)胞測序結(jié)果動輒上百G數(shù)據(jù)量,龐大的數(shù)據(jù)對于分析平臺和分析能力有著很高的要求,單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序(scRNA-Seq)在單細(xì)胞懸液制備的過程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu),無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個問題,其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息。烈冰斥巨資引進(jìn)Novaseq6000,開啟更大通量測序新紀(jì)元。武漢上海烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組服務(wù)機(jī)構(gòu)
空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和玻片有效區(qū)域的利用率、貼片的質(zhì)量和透化時間息息相關(guān)。貼片質(zhì)量不良會影響總的有效spot數(shù)等;而透化不合理會導(dǎo)致spot的reads數(shù)、基因中位數(shù)等參數(shù)。而在特異性基因表達(dá)方面,我們也可以統(tǒng)計(jì)空間轉(zhuǎn)錄組群體的特異性基因表達(dá)即Markergene,將他們在組織切片以及空轉(zhuǎn)上進(jìn)行著色。我們也可以對于任意一個已知的基因或者數(shù)據(jù)庫中的一些細(xì)胞Marker,然后將其在基因表達(dá)在空間轉(zhuǎn)錄組的切片以及HE染色上展示自己的基因表達(dá)進(jìn)而了解,群體中的可能的細(xì)胞組成關(guān)系。廈門空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析可視化個性化制定測序項(xiàng)目方面,滿足從檢測基因到蛋白的多組學(xué)測序要求。
烈冰生物已空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)提供從一個組織切片樣本中獲取包括空間信息在內(nèi)的全部轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從而可以區(qū)分和定位功能基因在特定組織區(qū)域內(nèi)的活躍表達(dá)。其可以檢測組織樣本中的所有基因活動,并繪制活動發(fā)生的位置,這將有助于科學(xué)家更好地構(gòu)建生物圖譜,并進(jìn)一步理解疾病和生物學(xué)過程。目前,空間轉(zhuǎn)錄組主要應(yīng)用于多種疾病、免疫、發(fā)育、神經(jīng)和病理學(xué)等研究領(lǐng)域。烈冰生物具有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)、豐富的切片經(jīng)驗(yàn),配置了國際主流的儀器設(shè)備,實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)針對不同組織類型優(yōu)化完善實(shí)驗(yàn)方案,并制定了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室SOP流程,保證空間轉(zhuǎn)錄組切片的質(zhì)量,全優(yōu)保障測序數(shù)據(jù)質(zhì)量。
空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可以用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析策略進(jìn)行分析,例如,利用GO和Pathway分析篩選不同發(fā)育時期特定空間區(qū)域內(nèi)的信號通路及其關(guān)鍵基因的較大情況,揭示在特定發(fā)育時期特定區(qū)域內(nèi)發(fā)生的生物學(xué)過程。針對任何一個基因,空間轉(zhuǎn)錄組可以顯示表達(dá)該基因的點(diǎn)陣及其空間排布;單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組可以給出該基因表達(dá)的細(xì)胞類群;原位測序可以給出該基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)狀況。通過不同發(fā)育時間點(diǎn)的信息比較,可以分析細(xì)胞類群在某個部位在不同時間點(diǎn)的差異,給出其在細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)的演變狀況??臻g轉(zhuǎn)錄組測序因其強(qiáng)大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系,一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。
空間轉(zhuǎn)錄組研究的的必耍性:研究單細(xì)胞是想要探究細(xì)胞間的異質(zhì)性,但是常規(guī)的單細(xì)胞是將細(xì)胞解離成單細(xì)胞懸液,然后利用單細(xì)胞分離技術(shù)(微孔,微板,液滴)等方法實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞建庫,這里比較大的問題是是細(xì)胞失去了原本在組織的空間信息。然而這個空間信息在實(shí)際研究中是非常重要。特別是在研究細(xì)胞命運(yùn)機(jī)制及細(xì)胞譜系發(fā)生空間位置的信息顯得尤為重要,因此發(fā)展空問轉(zhuǎn)錄組技術(shù)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的位置信息的保留,對研究此類細(xì)胞狀態(tài)尤為必要。烈冰開展了空間轉(zhuǎn)錄組、單細(xì)胞多組學(xué)以及空間轉(zhuǎn)錄組等多種產(chǎn)品在內(nèi)的全套科研解決方案。成都scRNA空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)公司
自主研發(fā)PanoCell單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)測序平臺。武漢上海烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組服務(wù)機(jī)構(gòu)
空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個階段:1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分;2.Spot點(diǎn)陣的分群與定義;3.Spot分群的功能與生物學(xué)價(jià)值。每一個部分都不可或缺,其結(jié)果都對后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的,都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計(jì)。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細(xì)胞的原始數(shù)據(jù)過濾策略即可,左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負(fù)荷。隨后,采用10X官方的Spatialranger的策略進(jìn)行后續(xù)分析,解析出位于空間位置中的有效的Spot表達(dá)矩陣。武漢上海烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組服務(wù)機(jī)構(gòu)
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