RNA測序（RNA-seq）是轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的重要工具，也是生命科學(xué)領(lǐng)域常用的技術(shù)之一。相比于傳統(tǒng)通路研究低維度、低通量的局限性，轉(zhuǎn)錄組學(xué)有以下優(yōu)勢：1）能夠動態(tài)考察細(xì)胞基因組的表達(dá)，多維度地反映差異變化；2）可用于研究占RNA絕大部分的非編碼RNA，研究其結(jié)構(gòu)以及在細(xì)胞生命活動中的重要調(diào)控作用；3）與蛋白組學(xué)研究相互補(bǔ)充，多角度呈現(xiàn)細(xì)胞水平的變化信息。作為轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的技術(shù)基礎(chǔ)，RNA測序技術(shù)也在不斷地更新迭代，現(xiàn)如今更大通量、更深精度的測序?yàn)楸姸嗫蒲泻歪t(yī)學(xué)工作者提供了豐富的工具和探索真理的手段。多組學(xué)技術(shù)結(jié)合了不同的生物數(shù)據(jù)集，如基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)。重慶烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)
單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測技術(shù)的完善,但即使在單細(xì)胞測序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細(xì)胞水平協(xié)同檢測多個(gè)不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學(xué)都有不同的特性和測量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細(xì)胞水平對多種組學(xué)方法進(jìn)行整合和應(yīng)用時(shí),需要在策略上做出改進(jìn),以保證各組學(xué)間的上游建庫以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時(shí)也要明確技術(shù)的局限性及其對研究結(jié)果的潛在影響。成都BD Rhapsody單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司以單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組為中心的多組學(xué)聯(lián)合分析有利于更好地理解基因變化與表型變化之間的關(guān)聯(lián)性。
當(dāng)蜂巢孔內(nèi)同時(shí)落入細(xì)胞和磁珠后，接下去可以往BDCartridge板中加入細(xì)胞裂解液對細(xì)胞進(jìn)行裂解，使細(xì)胞內(nèi)的RNA與磁珠上的標(biāo)簽進(jìn)行結(jié)合，完成每個(gè)細(xì)胞內(nèi)RNA的捕獲和標(biāo)記。這時(shí)，再將捕獲了RNA的磁珠進(jìn)行回收，待所有質(zhì)控結(jié)果確認(rèn)通過后就可以進(jìn)行后續(xù)的RNA反轉(zhuǎn)錄、cDNA第二鏈合成等實(shí)驗(yàn)操作。而BDCartridge板則需要再進(jìn)行一次成像，獲得磁珠收集后的掃描圖，判斷磁珠是否已經(jīng)被有效收集。根據(jù)每一步的質(zhì)控結(jié)果，烈冰科技（NovelBio）單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)團(tuán)隊(duì)會根據(jù)單細(xì)胞分選的實(shí)驗(yàn)結(jié)果生成實(shí)驗(yàn)總結(jié)報(bào)告，判斷每一步驟是否通過質(zhì)控，并得到捕獲的單細(xì)胞數(shù)量以及雙細(xì)胞比例，對整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)評估。若所有過程通過質(zhì)控，實(shí)驗(yàn)樣本即可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。
基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴(kuò)增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時(shí)使用特殊標(biāo)記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團(tuán)，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團(tuán)封閉，保證一次循環(huán)只上一個(gè)dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時(shí)，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團(tuán)和疊氮基團(tuán)，開啟下一循環(huán)。通過分析讀取同一位點(diǎn)的熒光，實(shí)時(shí)獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。單細(xì)胞多組學(xué)測序主要包含細(xì)胞分離、文庫構(gòu)建、高通量測序和生物信息學(xué)分析等步驟。
BD的技術(shù)不再采用利用微流控孔道射出細(xì)胞和射出的磁珠碰撞的過程，進(jìn)行單細(xì)胞捕獲的技術(shù)，轉(zhuǎn)而采用CytoSeq特有的蜂窩板技術(shù)。該技術(shù)用20萬+的微孔（該數(shù)量級遠(yuǎn)大于Input細(xì)胞數(shù)量），保證單孔中的單細(xì)胞捕獲。同時(shí)避免了10X中存在的概率碰撞影響捕獲效率的問題，采用微孔捕獲相對會有更好的捕獲效率（來自兩家企業(yè)商業(yè)宣傳資料比對），保證Input細(xì)胞的高效使用。對于Input細(xì)胞的量更少的情況，可以基于百萬級別的細(xì)胞總量開始進(jìn)行前期處理以及后期捕獲操作。而在細(xì)胞捕獲完成后，進(jìn)行細(xì)胞裂解后，同樣的也進(jìn)行細(xì)胞中RNApolyA序列的抓取工作。利用單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)能夠更有效地研究細(xì) 胞在特定時(shí)空狀態(tài)下各組學(xué)間的復(fù)雜聯(lián)系。深圳BD單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)
隨著組學(xué)新技術(shù)的不斷涌現(xiàn)，高通量的方向發(fā)展，通過對多組學(xué)數(shù)據(jù)的整合分析，已成為科研究新方向。重慶烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)
當(dāng)下，單細(xì)胞測序已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵過程和事件，如疾病從輕癥病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移病變的發(fā)展，以及疾病對多種藥物的反應(yīng)等等。單細(xì)胞測序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核，進(jìn)而對于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測序得到結(jié)果的技術(shù)，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會互相影響或者轉(zhuǎn)化么？免疫研究中，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會生效么？重慶烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)
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