賽多利斯血小板裂解液生產(chǎn)商

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-08

本發(fā)明涉及細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,特別涉及一種血小板裂解液的制備方法及其應(yīng)用,用于替代動(dòng)物來源的血清,為間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)提供的營養(yǎng)。該制備方法包括:將血小板在20~24℃振蕩保存1~5d,采用反復(fù)凍融法和超聲法進(jìn)行處理,離心,收集上清液,去除纖維蛋白,獲得血小板裂解液.本發(fā)明提供的血小板裂解液的制備方法可明顯提高血小板裂解液中細(xì)胞因子含量,且可進(jìn)行細(xì)胞因子的定量平衡,有利于減少產(chǎn)品批間的差異,可達(dá)到穩(wěn)定的促進(jìn)人源性細(xì)胞生長的作用。GMP等級(jí)的血小板裂解液不含動(dòng)物源成分!賽多利斯血小板裂解液生產(chǎn)商

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前述所說的生長因子大多存在于血小板內(nèi)部的α顆粒中,當(dāng)血小板被活化后會(huì)產(chǎn)生脫顆粒作用(即血小板的α顆粒會(huì)和細(xì)胞膜融合),進(jìn)而釋放大量活化的生長因子。而人源血小板裂解物就是直接將人類來源血小板細(xì)胞經(jīng)過連續(xù)的反復(fù)凍融裂解后,進(jìn)一步提純這些血小板脫顆粒的商品;人源血小板裂解物除了擁有比富血小板血漿更高的生長因子濃度,更用特殊工藝去除了細(xì)胞碎片,大幅降低了使用過程中的免疫原性。人源血小板裂解物的使用方式非常方便簡單,在培養(yǎng)基中添加5%血小板裂解物,混合均勻后即可直接用來培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞,且在傳代過程中不需要預(yù)包被培養(yǎng)皿。適合應(yīng)用在多種來源的間充質(zhì)原代干細(xì)胞培養(yǎng)過程呦。達(dá)科為血小板裂解液沉淀血小板裂解液的使用方法是什么樣的?

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細(xì)胞zhiliao的生產(chǎn)是一項(xiàng)費(fèi)時(shí)又昂貴的工程。優(yōu)化生產(chǎn)工藝通常會(huì)涉及優(yōu)化培養(yǎng)參數(shù)去減少時(shí)間、降低成本,同時(shí)提供呈現(xiàn)預(yù)期療效的表型。細(xì)胞增長所需的培養(yǎng)基補(bǔ)充劑也是整個(gè)細(xì)胞生產(chǎn)工藝中的一個(gè)較關(guān)鍵的因素。胎牛血清(FBS)一直以來被作為是細(xì)胞培養(yǎng)的常用補(bǔ)充劑,但因涉及倫理和安全問題,如今從加工過的血液中提取的人源培養(yǎng)基補(bǔ)充劑已經(jīng)得到越來越多的使用,血小板因其在血栓形成中的作用而聞名,很近,血小板被認(rèn)為是傷口部位再生過程的關(guān)鍵介質(zhì)。血小板裂解過程中釋放的生長因子和細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)局部免疫應(yīng)答,并啟動(dòng)局部組織的加速恢復(fù)(圖1)。考慮到血小板在人類生物學(xué)中這些作用,也就不難理解為什么處理過的血小板裂解液能夠給細(xì)胞培養(yǎng)基提供可靠的促生長特性了。

本課題在體外分離、培養(yǎng)和鑒定人牙髓干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞及根尖牙rutou干細(xì)胞的基礎(chǔ)上,通過比較體內(nèi)、外不同培養(yǎng)模式下,血小板裂解液對(duì)這三種牙源性干細(xì)胞增殖及分化的影響,以期找到PL應(yīng)用于牙源性干細(xì)胞培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化的較好方式,為研究相關(guān)機(jī)制及組織工程應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),同時(shí)為將來PL在臨床zhiliao方面的應(yīng)用提供新的思路。結(jié)果如下。1.牙髓干細(xì)胞、根尖牙rutou干細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定使用酶消化法或組織塊法分離獲得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs,利用有限稀釋法克隆化培養(yǎng)以純化傳代細(xì)胞;采用免疫細(xì)胞染色及流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞STRO-1等表型,確定所獲細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞屬性。采用成脂誘導(dǎo)及成骨/成牙本質(zhì)誘導(dǎo)驗(yàn)證細(xì)胞的多向分化能力。2.血小板裂解液的制備及相關(guān)培養(yǎng)體系的建立使用10人份機(jī)**小板,混合后利用凍融裂解法制得滿足實(shí)驗(yàn)需要的血小板裂解液PL;將PL制成品以一定的體積濃度比加入普通培養(yǎng)基及礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制成條件培養(yǎng)液;將擴(kuò)增培養(yǎng)所獲的牙源性干細(xì)胞以平面培養(yǎng)或復(fù)合HA-TCP支架培養(yǎng),營造不同的細(xì)胞培養(yǎng)空間環(huán)境。血小板裂解液是由富含血小板的血漿純化萃取而成,包含很多不同的細(xì)胞生長因子.

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血小板裂解液解凍后請(qǐng)立即進(jìn)行培養(yǎng)基的配制,配置好的培養(yǎng)基在2-8°C環(huán)境下保存并盡快使用,不建議超過21天。如解凍后的原瓶無法全部使用,建議按需分裝成合適的小瓶中進(jìn)行-20°C保存一旦產(chǎn)品瓶或袋經(jīng)過初始解凍過程,建議盡快將產(chǎn)品置于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。盡管對(duì)于儲(chǔ)存在2-8°C的準(zhǔn)備好的含有hPL的培養(yǎng)基,Sexton的內(nèi)部測試有效期為21天,但建議客戶進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證研究,以確定其基于血小板裂解液的完整培養(yǎng)基的有效期。使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑等變量可能會(huì)縮短或延長完整培養(yǎng)基產(chǎn)品的有效期。血小板裂解液中的沉淀在使用前是否需要過濾掉?臨床等級(jí)血小板裂解液價(jià)格

用血液里的血小板濃縮物反復(fù)解凍,超聲處理可制備成人血小板裂解液。賽多利斯血小板裂解液生產(chǎn)商

本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液(NH和H)是在工業(yè)規(guī)模(很小批量為20L)生產(chǎn)的,具備高度的批間一致性。將脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進(jìn)行傳代培養(yǎng)11代。在DME/F-12中分別添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并與10%胎牛血清進(jìn)行比較。羊膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞也在2.5或5%Stemulate中培養(yǎng),與10%胎牛血清相比。牙髓來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并與添加10%FBS的培養(yǎng)基進(jìn)行比較。在所有實(shí)驗(yàn)中,每天都監(jiān)測細(xì)胞,每次傳代結(jié)束時(shí),收獲細(xì)胞,并使用臺(tái)盼藍(lán)和一個(gè)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)然后繼續(xù)傳代。賽多利斯血小板裂解液生產(chǎn)商

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