細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉染,物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體,以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感。
用PEI轉染試劑時出現(xiàn)沉淀是什么原因?上海PEI轉染試劑哪個品牌好
準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Polysciences產(chǎn)品,歡迎咨詢上海曼博生物!PolysciencesPEI轉染試劑配置方法PEI轉染試劑的殘留檢測方法怎么開發(fā)?
瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。更多關于Polysciences PEI,歡迎咨詢上海曼博生物!
穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。
哪家有GMP等級的PEI轉染試劑?
線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結合于高電荷陰離子基質。工業(yè)應用上線性化pei可改善負電荷染料的物理外觀以調(diào)整染料的化學特性和增強染料與固相基質的黏附能力,常用作黏附增強劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應用上;線性化pei能與dna或其他負電荷生物大分子簡單結合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(vectorcarrier),即轉染試劑。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,生命科學領域一站式供應鏈體系,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢.有哪些比較好的轉染試劑?支鏈PEI轉染試劑中國代理權
25K和40K的PEI轉染試劑有哪些區(qū)別?上海PEI轉染試劑哪個品牌好
材料:質粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。
上海PEI轉染試劑哪個品牌好
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司位于自由貿(mào)易試驗區(qū)達爾文路16幢104室,是一家專業(yè)的生物醫(yī)藥科技(人體干細胞、基因診斷與zhiliao技術開發(fā)和應用除外)領域內(nèi)的技術開發(fā)、自有技術轉讓,并提供相關的技術咨詢和技術服務;計算機軟件的開發(fā)、設計、制作(音像制品、電子出版物除外)、銷售自產(chǎn)產(chǎn)品;實驗室試劑及耗材(藥品、危險品除外)、化工原料及產(chǎn)品(除危險化學品、監(jiān)控化學品、煙花爆竹、民用baozha物、易制毒化學品)、儀器儀表、機械設備、電子設備、塑料制品、玻璃制品、辦公用品、電子產(chǎn)品的批發(fā)、進出口、傭金代理(拍賣除外)?!疽婪毥?jīng)批準的項目,經(jīng)相關部門批準后方可開展經(jīng)營活動】公司。在曼博生物近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote等。我公司擁有強大的技術實力,多年來一直專注于生物醫(yī)藥科技(人體干細胞、基因診斷與zhiliao技術開發(fā)和應用除外)領域內(nèi)的技術開發(fā)、自有技術轉讓,并提供相關的技術咨詢和技術服務;計算機軟件的開發(fā)、設計、制作(音像制品、電子出版物除外)、銷售自產(chǎn)產(chǎn)品;實驗室試劑及耗材(藥品、危險品除外)、化工原料及產(chǎn)品(除危險化學品、監(jiān)控化學品、煙花爆竹、民用baozha物、易制毒化學品)、儀器儀表、機械設備、電子設備、塑料制品、玻璃制品、辦公用品、電子產(chǎn)品的批發(fā)、進出口、傭金代理(拍賣除外)。【依法須經(jīng)批準的項目,經(jīng)相關部門批準后方可開展經(jīng)營活動】的發(fā)展和創(chuàng)新,打造高指標產(chǎn)品和服務。誠實、守信是對企業(yè)的經(jīng)營要求,也是我們做人的基本準則。公司致力于打造***的血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機。