SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

PEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性呢？SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

CHO細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理有哪些不錯的PEI轉(zhuǎn)染試劑？

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。5.轉(zhuǎn)染24h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上），在CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。

用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因？

準備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences產(chǎn)品，歡迎咨詢上海曼博生物！Polysciences轉(zhuǎn)染試劑怎么樣？無動物源成分PEI轉(zhuǎn)染試劑

PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么呢？SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

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上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019-02-15年，在此之前我們已在血小板裂解液，WB自動孵育系統(tǒng)，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機行業(yè)中有了多年的生產(chǎn)和服務(wù)經(jīng)驗，深受經(jīng)銷商和客戶的好評。我們從一個名不見經(jīng)傳的小公司，慢慢的適應(yīng)了市場的需求，得到了越來越多的客戶認可。公司業(yè)務(wù)不斷豐富，主要經(jīng)營的業(yè)務(wù)包括：血小板裂解液，WB自動孵育系統(tǒng)，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機等多系列產(chǎn)品和服務(wù)?？梢愿鶕?jù)客戶需求開發(fā)出多種不同功能的產(chǎn)品，深受客戶的好評。公司秉承以人為本，科技創(chuàng)新，市場先導(dǎo)，和諧共贏的理念，建立一支由血小板裂解液，WB自動孵育系統(tǒng)，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機**組成的顧問團隊，由經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員組成的研發(fā)和應(yīng)用團隊。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司依托多年來完善的服務(wù)經(jīng)驗、良好的服務(wù)隊伍、完善的服務(wù)網(wǎng)絡(luò)和強大的合作伙伴，目前已經(jīng)得到醫(yī)藥健康行業(yè)內(nèi)客戶認可和支持，并贏得長期合作伙伴的信賴。