TAKARA慢病毒轉導實驗寶典

LentiBOOST 目前在美國和歐洲的多個臨床試驗中使用。LentiBOOST（Pharma grade）jin用于藥物級的臨床前研究和工藝開發(fā)，以及評估研究。LentiBOOST（GMP grade）用于臨床階段方案，目前美國和歐洲多個 Phase III 和 Phase I/II 臨床試驗正在進行。Lentiboost可增強慢病毒轉導效率，高達90%以上，研究證明對于細胞增殖無不良影響，且在T細胞中觀察到一定的促增殖效果?？蓽p少MOI，從而降低物料成本。均勻增加慢病毒轉導細胞的數(shù)量，但不會過度增加單個細胞病毒載體拷貝數(shù)（VCN），符合FDA/EMA對ATMP產品的安全標準。加入什么試劑可以提高轉導效率？TAKARA慢病毒轉導實驗寶典

di yi代慢病毒載體以Naldini以及Kafri[2]構建的三質粒系統(tǒng)為dai biao。該載體系統(tǒng)由包裝質粒、包膜質粒及載體質粒3種質粒組成。二代慢病毒載體系統(tǒng)是在di yi代基礎上改進的，在包裝質粒中刪去了HIV的所有附屬基因vif、vpu、vpr和nef，以減少產生RCR的風險。這些附屬基因的去除并不影響病毒的滴度和轉染能力，同時增加了載體的安全性。第三代慢病毒載體系統(tǒng)又增加了兩個安全特性：一是構建了自身失活的慢病毒載體，即刪除了U3區(qū)的3’ LTR，使載體失去HIV-1增強子及啟動子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉錄出RNA；二是去除了tat基因，代之以異源啟動子序列，這樣原始的HIV基因組中的9個基因在慢病毒載體中只保留了3個（gag、pol和rev） ，因此第三代慢病毒載體系統(tǒng)更加安全。與第三代系統(tǒng)相比，第二代慢病毒系統(tǒng)使用更多的HIV蛋白（在較少的質粒上）以產生功能性慢病毒顆粒。lentiBOOST慢病毒轉導關于慢病毒轉導的臨床實驗。

LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉導增強劑，可以按照現(xiàn)行的GMP標準生產，且很容易應用于現(xiàn)有的轉導方案，并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細胞的轉導研究。人間充質干細胞 (MSCs) 的慢病毒轉導可誘導長期轉基因表達，并為多種基因zhi liao應用帶來巨大希望。Polybrene是實驗室研究中Zui常用的提高病毒基因轉導效率的試劑，但它未被批準用于人體，并且還被證明會損害MSCs細胞的增殖和分化。因此，優(yōu)化轉導方案以應用于臨床試驗是非常有必要的。LentiBOOST是德國Sirion Biotech開發(fā)的一種高效、無細胞毒性的慢病毒轉導增強劑，用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉導。

產品簡介：LentiBOOST是德國SirionBiotech開發(fā)的一種高效、無細胞毒性的慢病毒轉導增強劑，用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉導。它是一種非離子型、非受體依賴性的表面活性劑，通過降低細胞膜粘稠度、提高脂質交換和跨膜轉運，促進慢病毒與細胞膜的融合，提高慢病毒轉導效率。目前LentiBOOST慢病毒轉導增強劑在美國和歐洲已有30多個藥物phaseIII/II/I臨床實驗中，并有相關藥物已上市銷售。產品特點：1.增強慢病毒轉導效率，可高達90%—提高zhi liao蛋白表達量，有利于取得臨床試驗成功2.減少MOI低至2倍，從而降低COGS（Costofgoodssold）——減少Lentivirus的用量和物料成本3.控制單個細胞中的病毒載體拷貝數(shù)（VCN，VirusCopyNumber）——符合FDA/EMA對ATMPs(AdvancedTherapyMedicinalProducts)產品的安全標準4.易于使用——無需改變現(xiàn)有轉導流程，兼容已經開發(fā)流程5.提供研究級和GMP級——GMP級具有臨床試驗的所有必備文件6.30多種應用LentiBOOST的藥物已在美國和歐洲進入臨床試驗（PhaseIII和PhaseI/II）階段——加速了IND文件歸檔哪個品牌的慢病毒轉導增強劑比較好？

慢病毒gan ran效率受到多種因素的影響，首先，考慮病毒包裝制備是否存在問題，比如外源基因是否正確，病毒滴度是否合格等。其次，考慮病毒運輸和保存方式是否得當，解凍病毒一定要在冰上進行，避免反復凍融，否則會影響病毒滴度；-80℃保存半年以上需要重新測定滴度。細胞狀態(tài)對于慢病毒轉導效率也具有很大的影響，良好的生長狀態(tài)是達到高gan ran效率的保證，一般選擇細胞形態(tài)較好、輪廓清晰、處于對數(shù)生長期的細胞進行gan ran可提高gan ran效率。

第三代慢病毒載體系統(tǒng)又增加了兩個安全特性：一是構建了自身失活的慢病毒載體，即刪除了U3區(qū)的3’ LTR，使載體失去HIV-1增強子及啟動子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉錄出RNA；二是去除了tat基因，代之以異源啟動子序列，這樣原始的HIV基因組中的9個基因在慢病毒載體中只保留了3個（gag、pol和rev） ，因此第三代慢病毒載體系統(tǒng)更加安全。與第三代系統(tǒng)相比，第二代慢病毒系統(tǒng)使用更多的HIV蛋白（在較少的質粒上）以產生功能性慢病毒顆粒。第三代包裝系統(tǒng)不表示tat，被認為比第二代系統(tǒng)更安全，但可能更難使用，因為它們需要用四個單獨的質粒轉染才能產生功能性慢病毒顆粒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質?；蛩馁|粒包裝系統(tǒng)。

有可以增加慢病毒導的試劑么？智能慢病毒轉導注意事項

慢病毒轉染有什么限制？TAKARA慢病毒轉導實驗寶典

聚凝胺(polybrene)是一種陽離子聚合物,1971年研究證明它可提高逆轉錄病毒的轉導效率。polybrene的確切作用機制尚不清楚,多認為它是通過中和細胞表面與病毒粒子之間的負靜電斥力,使病毒粒子容易吸附在細胞表面,從而促進病毒轉導。在增強各種細胞的慢病毒轉導中，轉導效率隨polybrene濃度的增加而增加。但轉導增強的同時也會對細胞產生一定毒性作用，polybrene不僅對細胞增殖有劑量依賴性抑制作用,還會不同程度的影響各類細胞的生長潛力。更多關于慢病毒轉導的相關產品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！

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