即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務(wù)，以創(chuàng)新和為價(jià)值理念，通過自身研發(fā)團(tuán)隊(duì)，以及與國內(nèi)外專業(yè)科研團(tuán)隊(duì)強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，不斷創(chuàng)新，為生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產(chǎn)品和服務(wù)。生物醫(yī)學(xué)工程是綜合應(yīng)用生命科學(xué)與工程科學(xué)的原理和方法，從工程學(xué)角度在分子、細(xì)胞、組織、乃至整個(gè)人體系統(tǒng)多層次認(rèn)識(shí)人體的結(jié)構(gòu)、功能和其他生命現(xiàn)象，研究用于防病、治病、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品、裝置和系統(tǒng)技術(shù)的總稱。更多關(guān)于PEI相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！用PEI轉(zhuǎn)染時(shí)，一般和DNA的比例會(huì)是多少？即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題，歡迎咨詢上海曼博生物！也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-Bio無動(dòng)物源成分PEI轉(zhuǎn)染試劑病毒產(chǎn)量使用PEI轉(zhuǎn)染試劑時(shí)出現(xiàn)沉淀是什么原因？

對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品，每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測(cè),保證每批產(chǎn)品都100%合格、穩(wěn)定且品質(zhì)高,但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實(shí)驗(yàn)室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dnaRNA純度,細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度，分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴，針對(duì)極個(gè)別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們能友善解決。

接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。用PEI轉(zhuǎn)染試劑時(shí)出現(xiàn)沉淀是為什么？

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn)。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI，以至于相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn)：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí)，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯(cuò)，輕微混勻，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí)，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因?yàn)镻EI對(duì)細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS：事實(shí)證明，PEI是可行的，已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司！分子量為25000的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑即Polysciences23966轉(zhuǎn)染效率比較高.RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

使用PEI轉(zhuǎn)染時(shí)，一般和DNA的比例是多少？即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

Polysciences是一家化學(xué)品制造公司，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域。公司成立于1961年，起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案，幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后，開拓了在病理（組織研究）應(yīng)用產(chǎn)品，使組織除了石蠟包埋外，還能夠包埋在塑料塊中；開發(fā)染料和染色劑，以實(shí)現(xiàn)更好的樣品觀測(cè)方式。與government合作，開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作，開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品，并用于紫杉醇的初步臨床試驗(yàn)。繼而開發(fā)出超順磁珠，用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應(yīng)用，并不斷開發(fā)和增強(qiáng)其性能。近期業(yè)務(wù)擴(kuò)展到電子產(chǎn)品，Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術(shù)應(yīng)用中測(cè)量精度。公司秉承為應(yīng)用而研發(fā)，目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。PolysciencesInc.致力于提供先進(jìn)的技術(shù)、制造能力和技術(shù)支持，幫助客戶實(shí)現(xiàn)他們的目標(biāo)。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商，更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題，歡迎咨詢上海曼博生物！即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例