功能胰腺B細胞糖尿病細胞模型操作指南

在EndoC-βH5細胞中檢測到所有對β細胞身份和功能重要的轉(zhuǎn)錄因子的表達。與成人b細胞相比，EndoC-βH5細胞中的表達水平相似（FOXA2、MNX1、NKX2.2）或更高（HOPX、MAFB、NEUROD1、PAX6、PDX1）。GLIS3、NKX6.1和MAFA在EndoC-βH5細胞中以較低水平表達EndoC-βH5細胞中表達與胰島素分泌相關(guān)的受體，包括腎上腺素(ADRA2A)、脂肪酸(FFAR1、FFAR3)、GABA(GABRB3)、胰hao xue tang素(GCGR)、生長抑素(SSTR2)和腸jiang xue tang素受體，例如胰gao xue tang素樣受體肽-1(GLP1R)和胃抑制多肽(GIPR)。重要的是，EndoC-βH5細胞中的GLP1R、GIPR和GCGR比EndoC-bH1細胞中更豐富。糖尿病細胞模型真實模擬胰島B細胞分泌，且分泌性強。功能胰腺B細胞糖尿病細胞模型操作指南

EndoC-βH1使用慢病毒介導的基因轉(zhuǎn)移從人類胎兒胰腺中產(chǎn)生功能性β細胞，這些胰腺處于發(fā)育的早期階段，即9至11周，這段時間與β細胞分化的開始相吻合(33)。整合的轉(zhuǎn)基因SV40LT受大鼠胰島素啟動子控制，在胰島素陽性細胞中特異性表達。通過使用這種靶向方法，SV40LT在新形成的β細胞中表達，同時這些細胞頭次產(chǎn)生胰島素。因此，我們成功地模仿了用于產(chǎn)生功能性嚙齒動物β細胞系的轉(zhuǎn)基因方法(7,8,34)，用于從人胎兒胰腺中開發(fā)功能性人β細胞系。天津糖尿病細胞模型高效的葡萄糖依賴性胰島素分泌胰腺B細胞是高度特化的內(nèi)分泌細胞，產(chǎn)生、儲存和分泌胰島素.

Humancelldesign開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細胞系生產(chǎn)方法。首先，將每個轉(zhuǎn)導的人類胎兒胰腺芽移植到2或3只SCID小鼠的腎被膜下，因為該部位是人類胰腺發(fā)育的允許部位。在6到8個月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤，這導致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離，用在大鼠胰島素啟動子控制下表達hTERT的慢病毒進行轉(zhuǎn)導，并移植到其他SCID小鼠中。這些小鼠在2至3個月內(nèi)出現(xiàn)低血糖，胰島素陽性細胞大量擴增。這種體內(nèi)擴增有助于維持大量增殖的胰島素細胞，并允許定義允許的培養(yǎng)條件，在這種條件下，可以在體外建立永生化細胞系。

HumanCellDesign(HCD)是專門從事人源胰島β細胞系構(gòu)建和開發(fā)的公司。人源胰島β細胞模型構(gòu)建技術(shù)性文章早期發(fā)表于2011年，相關(guān)文章總引用量達到600+，人源胰島β細胞模型已經(jīng)被全球200多家生物醫(yī)藥和生命科研機構(gòu)作為糖尿病細胞模型使用。HCD具有代表性的細胞系有EndoC-BH1，EndoC-BH3，EndoC-BH5，GLTxEndoC-BH5，HLA-A2EndoC-BH5等，細胞系可作為糖尿病細胞模型和糖尿病替代細胞zhi liao模型使用。Human Cell Design 的產(chǎn)品不僅限于人源胰島β細胞模型，還包括各種配套的細胞培養(yǎng)試劑和實驗方案。這些產(chǎn)品經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制和驗證，確保在各種實驗條件下都能表現(xiàn)出色。通過與科研機構(gòu)和生物醫(yī)藥企業(yè)的緊密合作，HCD 不斷改進其產(chǎn)品和服務(wù)，以滿足不斷變化的研究需求，推動科學進步。在表型上具有和天然胰島素相同的表達marker。

在胰島細胞刺激中，基礎(chǔ)和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數(shù)為11.6±1.8。通過應用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM)，驗證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加，從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/10⁶細胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖，分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/10⁶細胞。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細胞，無限接近天然人源胰島B細胞，其胰島素分泌功能與天然細胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上（左圖），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應（右圖），對GLP-1R激動劑， Exendin4刺激產(chǎn)生明細那反饋， 且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應。IFNg 和 IL1b 處理細胞 24 小時后進行 RNA-seq 以檢查 EndoC-BH5 細胞對細胞因子的反應性。安徽糖尿病細胞模型全球200+學術(shù)與制藥實驗室測試和批準

糖尿病細胞模型EndoC-BH1細胞檢測到B細胞轉(zhuǎn)錄因子PDX1, MAFA, NKX6-1和NEUROD1表達與人胰島細胞制備相似。功能胰腺B細胞糖尿病細胞模型操作指南

Human Cell Design 開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細胞系生產(chǎn)方法。首先，將每個轉(zhuǎn)導的人類胎兒胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的腎被膜下，因為該部位是人類胰腺發(fā)育的允許部位。在 6 到 8 個月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤，這導致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離，用在大鼠胰島素啟動子控制下表達 hTERT 的慢病毒進行轉(zhuǎn)導，并移植到其他 SCID 小鼠中。這些小鼠在 2 至 3 個月內(nèi)出現(xiàn)低血糖，胰島素陽性細胞大量擴增。這種體內(nèi)擴增有助于維持大量增殖的胰島素細胞，并允許定義允許的培養(yǎng)條件，在這種條件下，可以在體外建立永生化細胞系。Human Cell Design（HCD）開發(fā)了一種用于在人類胎兒組織中使用靶向Zhong Liu產(chǎn)生功能的人類β細胞系。在胰島素啟動子的控制下，用表達 SV40LT 的慢病毒載體轉(zhuǎn)導人類胎兒胰腺芽。功能胰腺B細胞糖尿病細胞模型操作指南