胰島素啟動子糖尿病細(xì)胞模型慢病毒載體構(gòu)建方法

EndoC-βH1細(xì)胞移植到小鼠體內(nèi)可以逆轉(zhuǎn)化學(xué)誘導(dǎo)的糖尿病，EndoC-βH1細(xì)胞每百萬細(xì)胞含有0.48μg胰島素，至少80代穩(wěn)定表達(dá)許多特異性β細(xì)胞標(biāo)記物，沒有任何其他胰腺細(xì)胞類型標(biāo)記物的大量表達(dá)。EndoC-βH1有潛力成為深入研究人類β細(xì)胞和藥物篩選的獨特工具，同時也是測試糖尿病替代細(xì)胞療法的有用臨床前模型。糖尿病細(xì)胞模型，EndoC-βH1、EndoC-βH3、EndoC-βH5等細(xì)胞dai biao了大規(guī)模藥物發(fā)現(xiàn)的獨特工具，為糖尿病細(xì)胞替代療法提供了臨床前模型。更多Human Cell Desgin相關(guān)產(chǎn)品信息，歡迎咨詢AlibioBuy！EndoC-B h1是一種永生細(xì)胞系，可進行反復(fù)的復(fù)蘇凍融，有效節(jié)約成本。胰島素啟動子糖尿病細(xì)胞模型慢病毒載體構(gòu)建方法

HCD利用人胎兒胰腺組織中的靶向ZhongLiu發(fā)生開發(fā)了永生化人β細(xì)胞系，其中使用慢病毒載體整合了兩個轉(zhuǎn)基因，SV40大T抗原(SV40-LT)和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)兩種轉(zhuǎn)基因均在β細(xì)胞特異性大鼠胰島素啟動子(RIP)的控制下表達(dá)。***代細(xì)胞，名為EndoC-βH1，以組成型方式表達(dá)SV40LT和hTERT，而在第二代EndoC-βH2和EndoC-βH3中，這些轉(zhuǎn)基因可在loxP介導(dǎo)的CRE重組后被切除，位點位于慢病毒骨架的3LTR。EndoC-βH5細(xì)胞是通過使用表達(dá)可切除的SV40LT和hTERT的慢病毒載體對人胎兒胰腺進行靶向ZhongLiu發(fā)生而獲得的.均質(zhì)胰島細(xì)胞系糖尿病細(xì)胞模型類似天然胰島B細(xì)胞糖尿病細(xì)胞模型EndoC-BH1細(xì)胞檢測到B細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子PDX1, MAFA, NKX6-1和NEUROD1表達(dá)與人胰島細(xì)胞制備相似。

在胰島細(xì)胞刺激中，基礎(chǔ)和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數(shù)為11.6±1.8。通過應(yīng)用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導(dǎo)的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM)，驗證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加，從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/106細(xì)胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖，分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/106細(xì)胞。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細(xì)胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細(xì)胞，無限接近天然人源胰島B細(xì)胞，其胰島素分泌功能與天然細(xì)胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細(xì)胞均一性達(dá)到90%以上（左圖），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)（右圖），對GLP-1R激動劑， Exendin4刺激產(chǎn)生明細(xì)那反饋， 且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。
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HCD 的 EndoC-BH5 細(xì)胞系在糖尿病研究中具有較多應(yīng)用，其在高葡萄糖環(huán)境下能夠表現(xiàn)出胰島素分泌反應(yīng)，為研究胰島素調(diào)節(jié)機制和開發(fā)新型抗糖尿病藥物提供了重要支持。這些細(xì)胞模型的高穩(wěn)定性和可重復(fù)性，使得研究結(jié)果更加可靠，為科學(xué)家們提供了寶貴的研究平臺。Human Cell Design 的細(xì)胞模型不僅在基礎(chǔ)研究中發(fā)揮重要作用，還在新藥開發(fā)和臨床前研究中具有重要應(yīng)用價值。通過這些高質(zhì)量的細(xì)胞模型，科學(xué)家們能夠更好地理解糖尿病的病理機制，篩選出具有潛力的新藥物，并驗證其在細(xì)胞水平上的療效。這些細(xì)胞模型為糖尿病zhi liao的創(chuàng)新提供了新的希望。更多關(guān)于Human Cell Design相關(guān)產(chǎn)品信息可以咨詢官網(wǎng)代理商AlibioBuy!曼聯(lián)是Human cell design在中國區(qū)的官方代理。

Humancelldesign開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細(xì)胞系生產(chǎn)方法。首先，將每個轉(zhuǎn)導(dǎo)的人類胎兒胰腺芽移植到2或3只SCID小鼠的腎被膜下，因為該部位是人類胰腺發(fā)育的允許部位。在6到8個月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤，這導(dǎo)致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離，用在大鼠胰島素啟動子控制下表達(dá)hTERT的慢病毒進行轉(zhuǎn)導(dǎo)，并移植到其他SCID小鼠中。這些小鼠在2至3個月內(nèi)出現(xiàn)低血糖，胰島素陽性細(xì)胞大量擴增。這種體內(nèi)擴增有助于維持大量增殖的胰島素細(xì)胞，并允許定義允許的培養(yǎng)條件，在這種條件下，可以在體外建立永生化細(xì)胞系。怎么開展糖尿病研究？天津糖尿病細(xì)胞模型全球200+學(xué)術(shù)與制藥實驗室測試和批準(zhǔn)

糖尿病細(xì)胞模型可用于胰島B細(xì)胞增殖、分化、去分化、凋亡研究。胰島素啟動子糖尿病細(xì)胞模型慢病毒載體構(gòu)建方法

根據(jù)嚙齒動物β細(xì)胞獲得的數(shù)據(jù)，葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白SLC2A2被認(rèn)為是葡萄糖感知的主要決定因素，而后來的研究表明，葡萄糖激酶(GLK)是主要決定因素。在人類β細(xì)胞中，GLK被認(rèn)為是葡萄糖感知的主要決定因素。為了克服這些限制，在HumanCellDesign中生成了新的β細(xì)胞系。EndoC-βH1是通過將表達(dá)SV40LT的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)到人類胎兒胰腺芽中來開發(fā)的。隨后將轉(zhuǎn)導(dǎo)的芽移植到SCID小鼠體內(nèi)，生成的表達(dá)SV40LT的細(xì)胞增殖并形成胰島素瘤。人源胰島B細(xì)胞模型對于與胰島相關(guān)的代謝疾病研究，包括糖尿病，糖尿病炎癥， 針對GLP-1R的Exendin4等類似藥物開發(fā)有重要作用。通過干細(xì)胞誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生的胰島B細(xì)胞存在純度較低，缺乏成熟胰島B細(xì)胞功能等問題。通過捐贈組織的胰腺B細(xì)胞提取，存在供應(yīng)量較低，明顯批次效應(yīng)，耗時較長等問題。使用糖尿病動物模型進行研究會比糖尿病細(xì)胞模型成本更高昂，周期更長。更多Human Cell Desgin相關(guān)產(chǎn)品信息，歡迎咨詢AlibioBuy！胰島素啟動子糖尿病細(xì)胞模型慢病毒載體構(gòu)建方法