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ELISA試劑盒中的底物是顯色反應(yīng)的關(guān)鍵物質(zhì)。在ELISA檢測的一步,酶會催化底物發(fā)生反應(yīng),從而產(chǎn)生顯色變化。不同類型的酶對應(yīng)不同的底物。例如,辣根過氧化物酶(HRP)常用的底物是四甲基聯(lián)苯胺(TMB),在HRP的催化下,TMB會發(fā)生氧化反應(yīng),從無色變?yōu)樗{(lán)色,再通過酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色。堿性磷酸酶(ALP)的底物有對-硝基苯磷酸酯(PNPP)等,PNPP在ALP的催化下會分解產(chǎn)生黃色產(chǎn)物。底物的選擇不僅要考慮與酶的適配性,還要考慮其顯色的靈敏度、穩(wěn)定性等因素。合適的底物能夠確保顯色反應(yīng)明顯、穩(wěn)定,從而準(zhǔn)確地反映出樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量。加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。黑龍江有什么ELISA試劑盒銷售價格
ELISA試劑盒中微孔板的設(shè)計是研發(fā)的一個重要方面。微孔板的材質(zhì)、形狀和表面處理方式都會影響檢測結(jié)果。材質(zhì)方面,常用的有聚苯乙烯等,這種材質(zhì)具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性。形狀上,一般為96孔或384孔板,96孔板適用于中小規(guī)模的檢測,384孔板則更適合大規(guī)模高通量檢測。表面處理方式包括物理吸附和化學(xué)共價鍵結(jié)合等,目的是使抗原或抗體能夠有效地固定在微孔板表面。例如,通過對微孔板表面進(jìn)行特殊的化學(xué)修飾,可以提高抗原或抗體的固定量和固定的穩(wěn)定性,從而增強(qiáng)試劑盒的靈敏度和特異性。吉林有什么ELISA試劑盒器材進(jìn)口ELISA試劑盒,上海伊麗薩生物科技代理進(jìn)口,滿足科研需求。
從反應(yīng)模式來看,ELISA試劑盒主要分為直接法、間接法、夾心法和競爭法。直接法是將酶直接標(biāo)記在一抗上,操作簡單,但靈敏度相對較低。間接法是先加入未標(biāo)記的一抗與抗原結(jié)合,再加入酶標(biāo)記的二抗,由于二抗可以結(jié)合多個一抗分子,所以這種方法可提高靈敏度。夾心法適用于檢測大分子抗原,它利用兩種特異性抗體,一種包被在微孔板上,另一種標(biāo)記酶,通過夾心結(jié)構(gòu)特異性地捕獲和檢測抗原,具有很高的靈敏度和特異性。競爭法主要用于檢測小分子抗原或半抗原,樣本中的抗原和酶標(biāo)記的抗原競爭與包被抗體結(jié)合,根據(jù)顯色程度判斷樣本中抗原的含量。
試劑盒成分1預(yù)包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化96T2酶標(biāo)記抗體:(30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化0.4mLx13標(biāo)準(zhǔn)品:重組小鼠白介素-60.5mLx24EIA緩沖液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS30mLx15標(biāo)記抗體稀釋液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS12mLx16顯色劑:TMB底物液15mLx17終止液:1N硫酸12mLx18濃縮洗滌液:(40倍濃縮)含1%BSA,0.05%吐溫20BPS50mLx1操作說明1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒有提供)酶標(biāo)儀(450nm)微移液管及其吸嘴量筒及燒杯去離子水冰箱(4°C)坐標(biāo)紙(log/log)吸水紙?jiān)嚬?用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋)溫育箱(37°C±1°C)洗瓶(用于洗板)一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
制備方法包括以下步驟:1)抗原表位的計算機(jī)篩選;2)抗原的制備;3)血清的采集;4)間接ELISA方法的建立;5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;7)對屠宰場進(jìn)行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出***豬的戊型肝炎病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測,可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播。上海伊麗薩生物科技,在進(jìn)口ELISA試劑盒代理上表現(xiàn)好。江蘇有什么ELISA試劑盒價位
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ELISA試劑盒的靈敏度是其重要的性能指標(biāo)之一。高靈敏度意味著能夠檢測到極低濃度的目標(biāo)物質(zhì)。ELISA試劑盒能夠達(dá)到高靈敏度主要得益于幾個方面。首先是抗原與抗體的特異性結(jié)合,這種特異性結(jié)合使得即使是微量的目標(biāo)物質(zhì)也能被識別。其次,酶標(biāo)記技術(shù)在其中起到了關(guān)鍵作用。酶具有放大信號的能力,少量的酶分子可以催化大量底物發(fā)生反應(yīng),從而產(chǎn)生明顯的顯色變化。例如,在檢測某些時,其在體內(nèi)的濃度可能非常低,但ELISA試劑盒可以通過其高靈敏度檢測到。這種高靈敏度使得ELISA試劑盒在疾病的早期診斷中非常有價值,能夠在目標(biāo)物質(zhì)濃度很低的情況下發(fā)現(xiàn)疾病的跡象,如在早期,標(biāo)志物濃度較低時就能被檢測出來。黑龍江有什么ELISA試劑盒銷售價格