植物外泌體提取方法參考

來源：發(fā)布時間：2023-12-27

from clipboard 近期，植物來源的外泌體狀納米顆粒（Plant-derived exosome-like nanoparticles，PENs）逐漸成為研究領(lǐng)域的熱點。小編在給客戶提供服務(wù)的過程中也收到很多這方面的咨詢，今天就將這些信息及如何收獲PENs做下簡單的整理，希望對大家有那么點點幫助。

一方面PENs是自然產(chǎn)生的，攜帶來自其母細(xì)胞的無害成分，并且其中一些已被證明具有治療作用；另一方面，更多研究者們也聚焦其作為哺乳動物細(xì)胞來源外泌體（Mammalian cell-derived exosomes，MDEs)替代品，以規(guī)避MEDs技術(shù)的局限性，尤其是在靶向遞送系統(tǒng)方面。

PENs的比較大優(yōu)勢在于樣本容易取得，適合于大規(guī)模生產(chǎn)。此外，PENs的生理、化學(xué)和生物學(xué)特性決定了其高穩(wěn)定性，可以在體內(nèi)的某些組織中積累并長期在外周血中循環(huán)，結(jié)合其低毒性、低免疫原性、高細(xì)胞攝取率的等優(yōu)點，因此在疾病治療以及作為納米載體的應(yīng)用開發(fā)中具有巨大的潛力。

PENs和MDEs之間有許多相似之處，但兩者仍存在較多差異。MDEs的脂質(zhì)雙層主要由膽固醇、糖苷脂、神經(jīng)酰胺和磷脂酰絲氨酸組成，它們具有穩(wěn)定性和獨特的剛度。相比之下，PENs的外泌體膜富含磷脂酸（PA）、磷脂酰膽堿（PC）、糖基二?；视停―GDG）和單半乳糖基二?；视停∕GDG）,這些獨特之處使其具有細(xì)胞調(diào)節(jié)活性，并可以在不同物種間的交流發(fā)揮更大作用[1]。常規(guī)的PENs樣本的制備結(jié)果同樣需要經(jīng)過透射電鏡、NTA檢測等質(zhì)控項目，這也對其前處理及提取提出了較高要求。

對于葡萄、生姜、蘋果等富含汁液的樣本，我們可以通過以下方式進行前處理：

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圖片來源：Asian J Pharm Sci.DOI 10.3389/fpls.2022.1064412

1、取得新鮮樣本后，根據(jù)樣本不同采取多次清洗或去皮步驟。

2、利用高速攪拌器（勻漿器）將樣本磨碎，過程避免溫度過高。

3、將取得的果汁或液體經(jīng)過1000g 10min、3000g 20min、10000g 60min多次離心，每次取上清，以去除雜質(zhì)及大顆粒。

4、利用0.45um的過濾器過濾掉液體上清中的雜質(zhì)，之后便可進行下一步的提取流程。

注：對于茶葉等汁水含量較低的樣本，則需要在清洗后在一定體積中的冷PBS緩沖液當(dāng)中行勻漿，之后再進行過濾操作。

作為外泌體提取的常見方法之一，沉淀法也十分適合PENs的提取。無論是單獨使用沉淀法還是沉淀法和超離法組合使用都能滿足較大規(guī)模PENs的提取要求。與其他方法相比，沉淀法在具有高得率的同時還可以最大程度保留PENs的活性并保持其形態(tài)，且由于其操作簡單耗時短，非常適合PENs的規(guī)?；苽?[2]。

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