江西上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-150

核酸酶活性受到很多因素影響，如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此，不同客戶、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一。目前，生物制藥行業(yè)對(duì)Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉，如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對(duì)于大部分使用Benzonase的項(xiàng)目，使用M-SAN HQ中鹽核酸酶可以完全替代，而且溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整，同樣酶量的M-SAN HQ對(duì)宿主細(xì)胞DNA（HCD）的去除效果更好、病毒載體得率更高。經(jīng)過(guò)工藝優(yōu)化后，可以將M-SAN HQ中鹽核酸酶的用量減少到原來(lái)的1/3-1/2，且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高。M-SAN HQ中鹽核酸酶兼容常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)基，在多種培養(yǎng)基條件下去除核酸污染效率更高；江西上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-150

跟其他類型的核酸酶一樣，SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶的滅活方法有很多，分為可逆滅活及不可逆滅活。金屬離子螯合劑如EDTA會(huì)可逆抑制兩者的活性，加入的EDTA濃度一般是溶液中Mg2+濃度的2倍左右即可完全抑制活性；后續(xù)補(bǔ)加過(guò)量的Mg2+即可恢復(fù)核酸酶活性。加熱、還原劑（如DTT）、咪唑、甘油及表面活性劑（如高于15%濃度的Triton X-100、SDS、尿素等）等都可以使其不可逆失活。在生物工藝流程，需要結(jié)合上下游應(yīng)用需要選擇合適的方法去除或滅活核酸酶。陜西培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950-202M-SAN HQ ELISA kit檢測(cè)產(chǎn)品操作簡(jiǎn)單，1.5–2hr即可完成檢測(cè)。

在生物工藝流程中，需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份，也需要在生產(chǎn)流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右，包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9，來(lái)自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右，M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此，在同樣的條件下，從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。

逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以將7.5Kb左右外源基因整合入靶細(xì)胞基因組，并穩(wěn)定持久地表達(dá)，已經(jīng)在批準(zhǔn)的CAR-T產(chǎn)品和許多臨床產(chǎn)品中得到應(yīng)用。Shou個(gè)成功的基因藥物臨床試驗(yàn)是利用小鼠白血病病毒(Murin Leukemia Virus,MLV，gamma逆轉(zhuǎn)錄病毒)作為基因轉(zhuǎn)移載體醫(yī)治兒童的X性染色體連鎖嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷（SCID-X1）。目前上市的6個(gè)細(xì)胞藥物產(chǎn)品全部采用逆轉(zhuǎn)錄病毒（3個(gè)為gamma逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，3個(gè)慢病毒載體）作為基因轉(zhuǎn)移載體。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體目前常用的主要有兩個(gè)：gamma逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(Retroviral vector,RV)和慢病毒載體(Lentivirus vector,LV)。兩種病毒均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，在自身攜帶的逆轉(zhuǎn)錄酶催化下將其正鏈RNA均逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。病毒顆粒比較大，約為100nm（70-100nm，有的至200nm）,外層為表面突起的脂蛋白套膜，套膜內(nèi)為20面體的衣殼（capsid）,核衣殼內(nèi)由一螺旋結(jié)構(gòu)的核酸。ArcticZymes Technologies旨在是研究和開發(fā)具有獨(dú)特特性的酶。

ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中鹽核酸酶，2021年推出對(duì)應(yīng)的M-SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中M-SAN HQ中鹽核酸酶的殘留含量，特異性的anti-M-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在孔板上，辣根過(guò)氧化酶HRP標(biāo)記anti-M-SAN作為檢測(cè)抗體，TMB是檢測(cè)反應(yīng)底物。該試劑盒特異識(shí)別M-SAN HQ中鹽核酸酶，對(duì)其它核酸酶沒(méi)有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.12-7.5ng/ml；12*8strips的設(shè)計(jì)規(guī)格，使用靈活，更能降低使用成本。中鹽核酸酶的生產(chǎn)在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上，增加了cGMP相應(yīng)要求。江西上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-150

M-SAN HQ中鹽核酸酶更適合細(xì)胞基因drug（如AAV、LVV、RV及OV等）的生產(chǎn)。江西上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-150

在傳統(tǒng)生物技術(shù)行業(yè)（如抗體、疫苗領(lǐng)域）使用的下游純化工藝步驟，已經(jīng)用于慢病毒的大規(guī)模下游處理。主要是基于膜(過(guò)濾/澄清，利用切向流過(guò)濾TFF進(jìn)行濃縮/滲濾，基于膜的色譜)和色譜(離子交換色譜IEC，親和色譜AC，體積排阻色譜SEC)的技術(shù)。這些不同的過(guò)程步驟的組合是可變的，在某些情況下，不同的純化方法可以用于相同的目的。此外，采用benzonase/M-SAN HQ中鹽核酸酶降解污染的DNA或者用于下游的一個(gè)步驟，或者用于病毒生產(chǎn)階段。江西上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-150