ArcticZymes Technologies有兩條產(chǎn)品線,分別針對分子診斷和生物藥物生產(chǎn)兩個領域。在分子診斷領域,產(chǎn)品有蝦堿酶(SAP)、UNG酶、等溫擴增酶(IsoPol)、連接酶、蛋白酶、內(nèi)切核酸酶及外切核酸酶等,涉及核酸抽提、擴增及測序等應用。在生物藥物生產(chǎn)領域,全球創(chuàng)新的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases, SANs)系列產(chǎn)品以其獨特優(yōu)勢,在細胞基因藥物及RNA藥物生產(chǎn)中表現(xiàn)出更好的性能。其中,鹽活性核酸酶SANs系列產(chǎn)品包含兩款產(chǎn)品,分別是SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶;兩款酶的差別在于發(fā)揮酶活的鹽濃度范圍分別是生理鹽濃度范圍和400-600mM高鹽濃度范圍。使用Benzonase時,不能把載體表面的DNA去除徹底,因而不能阻止純化的病毒載體聚集。江蘇進口生物試劑高鹽核酸酶
殘留的宿主DNA是生產(chǎn)中產(chǎn)生的雜質(zhì),其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風險。相關研究表明,基因的大小普遍在200bp以上,因此大于200bp有可能會有一定的致病性,而且殘留DNA片段越大,生物制品的風險等級越高。因此,各國監(jiān)管機構對其提出了嚴格要求。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)在《關于人類基因zhiliao新產(chǎn)品生產(chǎn)指導文件》中明確指出HCD的片段要小于200bp。2022年5月,國家藥品監(jiān)督管理局藥品評審中心(CDE)發(fā)布的《體內(nèi)基因藥物產(chǎn)品藥學研究與評價技術指導原則(試行)》中也明確指出需對DNA殘留量和殘留片段大小進行控制,建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。山西高鹽核酸酶70921-160SAN HQ高鹽核酸酶是用Pichia pastoris表達的重組非特異性內(nèi)切核酸酶。
在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA(HCD),并將其分解成足夠小的片段,以便在下游純化過程中去除。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,但實際生產(chǎn)中的核酸污染情況更加復雜。HCD通常以染色質(zhì)形式存在,與細胞裂解碎片、病毒顆粒等結合在一起,影響核酸酶的識別及剪切。因此,HCD去除的關鍵在于——核酸酶如何在復雜的生產(chǎn)體系中識別并剪切HCD。
市售的SAN HQ高鹽核酸酶有三個規(guī)格,分別是25kU、500kU及5MU,分別滿足研發(fā)初期及大規(guī)模生產(chǎn)各階段的要求。通過SDS-PAGE檢測蛋白純度在98%以上?;贏rcticZymes Technologies的30年的酶學開發(fā)及大規(guī)模生產(chǎn)經(jīng)驗,SAN HQ的生產(chǎn)體系穩(wěn)定,產(chǎn)品純度高,批次一致性好,無蛋白酶活性。廠家開發(fā)出特異的緩沖液體系,使SAN HQ保存起來更加穩(wěn)定,-15℃ - -30℃條件下有效期3年左右。研究數(shù)據(jù)表明,經(jīng)過5-6次的反復凍融,SAN HQ高鹽核酸酶活性沒有明顯變化。SAN HQ高鹽核酸酶具有熱不穩(wěn)定的特性,在還原劑存在條件下,50℃、30min孵育即可失活;
經(jīng)過多年的經(jīng)驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產(chǎn)品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產(chǎn)品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養(yǎng)基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產(chǎn)品、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測產(chǎn)品、AAV中和抗體蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、中國君研生物等。SAN HQ高鹽核酸酶更適合用于AAV生產(chǎn)。河南500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶70921-150
ArcticZymes廠家管控整個供應鏈及生產(chǎn)流程,協(xié)助客戶進行文件審計及現(xiàn)場審計。江蘇進口生物試劑高鹽核酸酶
AAV病毒滴度通常分為物理滴度和infection滴度。物理滴度一般是指基因組滴度或者衣殼滴度。在測定AAV的含量時,通常采用基因組滴度或者衣殼滴度作為單位,其中基因組滴度為攜帶基因組的AAV的濃度,衣殼滴度為AAV物理顆粒的濃度?;蚪M滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法來測定;衣殼滴度主要是通過ELISA、HPLC等方法來測定。AAV基因組滴度檢測的關鍵在于盡可能徹底去除AAV衣殼外的HCD殘留,減少污染核酸對qPCR或ddPCR的影響。經(jīng)典方法是加入常規(guī)核酸酶(如Dnase I、Benzonase等)消化AAV衣殼外的HCD殘留,然后加入Proteinase K破碎病毒衣殼,進行后續(xù)檢測。經(jīng)過對比發(fā)現(xiàn),用SAN HQ高鹽核酸酶替代常規(guī)核酸酶處理AAV病毒,能夠更高效去除衣殼外的核酸殘留,qPCR或ddPCR結果重復性更高、更穩(wěn)定。江蘇進口生物試劑高鹽核酸酶