廣東IgGZEROIdeS蛋白酶

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1和IgA2m1，產(chǎn)生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長，因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時間為過夜（16-18小時），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風險。該酶在pH值為6.0至8.0時具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產(chǎn)生活性?；钚詾?7°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段。廣東IgGZEROIdeS蛋白酶

大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖。一個重要的關鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線，因為它會影響穩(wěn)定性、溶解度、藥效學和藥代動力學特性。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開發(fā)和制造過程中，因此需要密切監(jiān)測。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個FabRICATOR消解位點和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測，從而可以監(jiān)測批次間的一致性和其他關鍵質(zhì)量屬性。江西GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體。

在Genovis，我們的策略是幫助客戶進行中級（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法，我們發(fā)現(xiàn)，與簡單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級方法具有優(yōu)勢。通過執(zhí)行中級描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實驗中獲得的所有信息，具有額外的優(yōu)勢。在對抗體進行完整質(zhì)量分析時，很難明確地識別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實驗可以執(zhí)行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識別修改，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個結(jié)構(gòu)域，這是你在完整水平上無法做到的。

Genovis的FabRICATOR MagIC自動樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個問題，對6種mAb的混合物進行強制降解（室溫下3個月），并通過反相LC-MS進行分析。當在完整水平上分析mAb時，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時出現(xiàn)許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級分析中的強大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時耗費資源的肽圖分析，所有這些都以相對較少的手動操作時間快速完成?？捎糜诳贵w高階結(jié)構(gòu)（HOS）結(jié)晶和NMR研究、雙抗或多抗的表征、單價結(jié)合研究或完整Fc聚糖分析。

大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架，雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性，例如單價結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性，它在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性，通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實現(xiàn)了完全消化，包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗證了其在生物制藥開發(fā)中的用途。度拉糖肽的連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點。甘肅IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis的FabDELLO作用于人 IgG1 鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基。廣東IgGZEROIdeS蛋白酶

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì)，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產(chǎn)生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長的肽，胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質(zhì)譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。廣東IgGZEROIdeS蛋白酶