重慶FabDELLOIdeS蛋白酶抗體酶切

樣品制備的條件可能會在樣品中誘發(fā)偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進(jìn)行質(zhì)譜分析。如果可能的話，避免多個(gè)步驟并在一鍋反應(yīng)中進(jìn)行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩(wěn)定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進(jìn)行了評估。數(shù)據(jù)顯示，GingisREX在6M時(shí)耐受尿素，吐溫高達(dá)1%，但活性在0.1%時(shí)受到SDC的負(fù)面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時(shí)顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應(yīng)，以同時(shí)消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細(xì)胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個(gè) scFv 融合，形成一個(gè)雙特異性分子，其中一個(gè) scFv 靶向細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞，另一個(gè)靶向Ai癥抗原。該蛋白質(zhì)由四個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成，兩個(gè) scFv 均由 VL 和 VH 區(qū)域組成，總共由三個(gè)柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質(zhì)的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質(zhì)譜法進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測構(gòu)成挑戰(zhàn)，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)MS儀器可能無法提供蛋白質(zhì)的單同位素分辨率。IgASAP酶是獨(dú)特的酶促工具，可實(shí)現(xiàn) IgA 的中級表征和質(zhì)量控制，用于疫苗診斷的開發(fā)過程。重慶FabDELLOIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價(jià)Fab片段以及IgA的中級分析，從而促進(jìn)IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中。獨(dú)特的酶促工具，可實(shí)現(xiàn)IgA的中級表征和質(zhì)量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個(gè)消化位點(diǎn)。云南IgGZEROIdeS蛋白酶在抗體及核酸藥領(lǐng)域，倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程，抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。

抗體的氧化是可能影響抗體功能的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需要密切定量和表征。它可能導(dǎo)致mAb的體內(nèi)半衰期、功效和穩(wěn)定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化產(chǎn)生的抗體亞基是研究抗體氧化的理想選擇。酶解的穩(wěn)健性允許在受監(jiān)管的環(huán)境中監(jiān)測抗體亞基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。該酶用于基于抗體的療法（如mAb、ADC、生物類似藥和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測試、生產(chǎn)監(jiān)測和克隆選擇。高度特異性-鉸鏈下方的一個(gè)消化位點(diǎn)快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的片段池實(shí)現(xiàn)基于抗體的生物zhiliao藥物的表征和質(zhì)量控制可固定在即用型離心柱中

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì)，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產(chǎn)生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長的肽，胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實(shí)現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。Genovis的FabDELLO可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人 IgG1，在兩小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段。

Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 （2D-NMR） 之后，可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程，是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇，在海報(bào)“FabALACTICA產(chǎn)生純和均相的mAb亞基，促進(jìn)2D-NMR波譜分析”中進(jìn)行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質(zhì)量信號和光譜分辨率導(dǎo)致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結(jié)構(gòu)變化、氧化和非氧化樣品之間的差異，并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與FabRICATOR活性兼容。山東FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的GingisREX （RgpB）可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析；產(chǎn)生更長的肽 - 提高序列覆蓋率。重慶FabDELLOIdeS蛋白酶抗體酶切

為了讓所有實(shí)驗(yàn)室都能同時(shí)快速自動消化多種抗體，Genovis的FabRICATORMagIC的設(shè)計(jì)具有靈活性，適用于一系列自動化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程，但它可以轉(zhuǎn)移到其他自動化平臺，如果沒有自動化，在振動臺上也能同樣出色地工作。消解后，將含有處理樣品的深孔板直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動進(jìn)樣器中進(jìn)行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容，以極大限度地減少自動化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時(shí)，樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中，然后將板放入儀器中。設(shè)計(jì)用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個(gè)步驟的孵育溫度和時(shí)間。重慶FabDELLOIdeS蛋白酶抗體酶切