黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

抗體的氧化是可能影響抗體功能的關鍵質(zhì)量屬性，需要密切定量和表征。它可能導致mAb的體內(nèi)半衰期、功效和穩(wěn)定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化產(chǎn)生的抗體亞基是研究抗體氧化的理想選擇。酶解的穩(wěn)健性允許在受監(jiān)管的環(huán)境中監(jiān)測抗體亞基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。該酶用于基于抗體的療法（如mAb、ADC、生物類似藥和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測試、生產(chǎn)監(jiān)測和克隆選擇。高度特異性-鉸鏈下方的一個消化位點快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的片段池實現(xiàn)基于抗體的生物zhiliao藥物的表征和質(zhì)量控制可固定在即用型離心柱中IgASAP Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學家的經(jīng)驗，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實驗中做了太多的肽圖譜，而中級水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設置和數(shù)據(jù)分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當然可以自動用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實上，肽圖譜是一個多步驟的過程，每一個步驟都可能破壞方法，并可能導致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓練給非專業(yè)人員。中級水平的方法很容易交叉訓練，我們的方法在質(zhì)量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。重慶FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學Genovis的GlySERIAS可以對融合蛋白、多特異性抗體。

大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖。一個重要的關鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線，因為它會影響穩(wěn)定性、溶解度、藥效學和藥代動力學特性。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開發(fā)和制造過程中，因此需要密切監(jiān)測。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個FabRICATOR消解位點和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測，從而可以監(jiān)測批次間的一致性和其他關鍵質(zhì)量屬性。

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1和IgA2m1，產(chǎn)生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長，因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時間為過夜（16-18小時），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風險。該酶在pH值為6.0至8.0時具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產(chǎn)生活性?；钚詾?7°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。用FabDELLO消化市售的IgG1 risankizumab(在下鉸鏈區(qū)域具有LALA突變)。

Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并在兩小時內(nèi)生成均質(zhì)的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在鉸鏈區(qū)下方的單個位點進行消化）。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu)（HOS）的NMR研究、結(jié)合研究等。突變的鉸鏈區(qū)域是zhiliao性候選抗體的常見修飾，以降低效應器功能。這些突變可能會影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如，高度特異性的FabRICATOR（IdeS）消化效率對含有常見LALA突變的抗體產(chǎn)生負面影響。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基，能夠?qū)哂型蛔冦q鏈區(qū)域的抗體進行流行的中級LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下鉸鏈區(qū)域具有LALA突變，并通過反相LC-MS進行分析。消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段。用20mMDTT還原片段，用于中級LC-MS分析，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了均相的Fc/2、輕鏈（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩(wěn)健性能。Genovis的策略是幫助客戶進行亞基分析，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品，如IdeS蛋白酶。湖南GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis亞基分析比肽圖譜具有簡單快速的巨大優(yōu)勢，更適用于高通量的檢測，并可用于支持肽圖分析。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應用包括蛋白質(zhì)組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復雜的數(shù)據(jù)解釋至關重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學