江西GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis提供具有低水平內Du素的FabRICATOR（IdeS）凍干酶，用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規(guī)格：2000和5000單位，分別用于消化2mg或5mgIgG。該產品配方每瓶的內Du素含量較低，2000單位小瓶的內Du素含量為<0.04EU/瓶，5000單位小瓶的內Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化，內DU素水平低；適用于靈敏的體內或基于細胞的檢測。FabRICATOR（IdeS）不需要還原條件來獲得比較好的活性。江西GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細表征和監(jiān)測關鍵質量屬性，例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發(fā)和穩(wěn)定性研究相關的大量樣品通常通過液相色譜質譜 （LC-MS） 進行分析。然而，在LC-MS之前進行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn)，Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性瓊脂糖珠上，現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上，可同時快速自動消化多種抗體，促進中級表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實驗和操作時間，降低樣品處理錯誤的風險，同時提高通量。河南GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切單一酶切位點和質譜的精度確保了Fc糖基化譜檢測，用于監(jiān)測批次間的一致性和其他關鍵質量屬性。

Blinatumomab（一種對 CD19 和 T 細胞標志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子）的研究級生物仿制藥在室溫下用固定化過夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通過LC-MS對消解樣品的直接分析表明，所有三個連接子區(qū)域均被消解，α-CD3 VL和VH鏈洗脫為一個色譜峰，α-CD19 VH和VL鏈作為單獨的峰洗脫。來自連接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 結構域的小峰顯示該短連接子未完全消化，表明 GlySERIAS 對短連接子的活性較低。與完整的蛋白質分析相比，四個結構域的分離提供了具有單同位素分辨率的高質量光譜?？梢杂^察到每個結構域的幾個不同變體，剩余的連接子殘基數(shù)量不同。在色譜分離過程中，α-CD3 VH結構域無法從α-CD19 VH結構域完全基線分離，導致在相關質譜中觀察到一些共洗脫。四個結構域的分離產生了有關在完整蛋白質水平上鑒定的蛋白質修飾位置的信息。例如，在完整水平上鑒定的 37 Da 的蛋白質修飾被分配給 α-CD3 VH 鏈。此外，240Da 和 320da 的兩個修飾分別被分配給 α-CD3 VL 結構域。后者還含有一個帶有五六個組氨酸殘基的 His 標簽。這些數(shù)據(jù)證明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 對包含多個柔性連接子蛋白進行質量控制的中級工作流程的強大功能。

抗體 Fc 糖基化譜是一種重要的 CQA，因為它會影響療效、和免疫原性。因此，需要從早期開發(fā)、工藝開發(fā)到質量控制和批量放行的整個過程對Fc聚糖譜進行監(jiān)測。傳統(tǒng)的分析方法基于對游離的聚糖進行熒光標記，然后通過HILIC-HPLC或CE進行分析，這需要多步驟的樣品制備方案，這需要大量的時間和資源。使用Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb，然后使用LC-MS進行中級分析，為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的替代方法。如上所示，它很容易實現(xiàn)自動化，以提高通量并降低處理錯誤的風險。FabRICATOR（IdeS）固定在磁珠上，可同時快速自動消化多種抗體，促進中級表征工作流程。

Genovis的FabRICATOR MagIC自動樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產或儲存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會影響zhiliao產品的質量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個問題，對6種mAb的混合物進行強制降解（室溫下3個月），并通過反相LC-MS進行分析。當在完整水平上分析mAb時，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時出現(xiàn)許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內酯 （+14 Da） 和二氧代內酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級分析中的強大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時耗費資源的肽圖分析，所有這些都以相對較少的手動操作時間快速完成。Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的離心柱中，這可以大限度地減少在樣品中殘留的酶。山西GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

LC-MS中級分析用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。江西GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR（IdeS）酶，是在鉸鏈下方對IgG進行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。酶解后，可以使用反相HPLC、質譜或其他分析方法分析片段?？贵w消化和亞基生成的自動化使生物反應器的在線監(jiān)測應用成為可能，例如，作為2D-LC-MS設置的一部分，將反應器直接耦合到MS。這種自動化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時間、樣品處理時間并提高了通量。江西GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學