河北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

Fc N-聚糖在抗體的效應功能中起著至關(guān)重要的作用，但可能會增加蛋白質(zhì)表征測定的復雜性。在天然條件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結(jié)構(gòu)。 為了證明PNGase F固定化和PNGase F凍干在天然反應條件下有效去除Fc N-聚糖，對zhiliao性抗體曲妥珠單抗進行了處理。圖2中的質(zhì)量數(shù)偏移表明，在37°C下用Genovis的PNGase F凍干或PNGase F固定化孵育1小時后，曲妥珠單抗上的Fc N-聚糖成功去除，與在溶液中用PNGase F凍干處理的樣品相比，沒有酶干擾用PNGase F固定處理的樣品的分析。在變性反應條件下，PNGase F 在 30 分鐘內(nèi)成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。河北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖：依那西普是一種融合蛋白，由TNF受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質(zhì)在Fc區(qū)域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇，使其成為一種非常難以在結(jié)構(gòu)上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性，制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品：（i）攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu)混合物的未經(jīng)處理的糖蛋白，（ii）用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產(chǎn)生裸核1結(jié)構(gòu)，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產(chǎn)生單個GalNAc殘基， 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應中處理三個樣品（圖1）。作為比較，SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應中，以將Fc區(qū)與大多數(shù)C端糖肽分離，以促進其表征。陜西瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究親和純化微離心柱，SialEXO 凍干 200 單位，OpeRATOR 凍干 200 單位。

Genovis的SialEXO固定化用于復雜糖蛋白的去唾液酸化：在設置反應條件時，需要在所需的反應時間和完成反應所需的酶量之間進行權(quán)衡。較高的酶量可保證在更短的時間內(nèi)完成周轉(zhuǎn)，但會使下游分析復雜化。為了避免此類問題，我們以離心柱形式固定了活性SialEXO。這允許以更短的孵育時間孵育具有明顯更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。這種糖蛋白是一種具有挑戰(zhàn)性的底物，具有 6 個 N- 和多達 26 個 O-聚糖，由 α2,3 和 α2,6 連接的唾液酸修飾。對游離的N-聚糖的分析表明，SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化，SialEXO固定化。

GlycOCATCH?親和純化：用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產(chǎn)品包含：4 個 GlycOCATCH 親和純化微離心柱，每個柱能夠結(jié)合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白（總共 200 μg）。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位，用于去除唾液酸；OpeRATOR 凍干 200 單位，用于結(jié)合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集；2. 復雜樣品的特異性凈化；3. 用于改進 MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集：O-連接聚糖參與多種生物過程，包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應、造血和細胞信號傳導。在大腸桿菌中表達，帶有His標簽，分子量為52 kDa。

Genovis的GlycOCATCH?是一種親和樹脂，可特異性結(jié)合O-糖基化（粘蛋白型）蛋白和肽，從而實現(xiàn)簡單的工作流程，以富集和純化攜帶O-聚糖的蛋白質(zhì)和肽。洗滌離心柱，并用8M尿素洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。對洗脫材料的分析表明，由于洗脫O-糖基化蛋白，并且樹脂與非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的結(jié)合可以忽略不計。選擇性結(jié)合 O-糖蛋白：為了測試選擇性，將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。為了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特異性，將O-glcyosyled肽（糖蛋白）與一系列未修飾的肽混合。上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”）代理Genovis的IdeS酶等。青海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。河北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

OglyZOR 來源于口腔鏈球菌，在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽，分子量為 227 kDa。SialEXO來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達。SialEXO酶含有His標簽，組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶；2. 降低樣品異質(zhì)性，揭示潛在的關(guān)鍵蛋白質(zhì)修飾；3. 完全、穩(wěn)健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶，用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發(fā)揮作用，因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。河北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶