河南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內完全去除，PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下，PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件，將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。河南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖：依那西普是一種融合蛋白，由TNF受體的胞外結構域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質在Fc區(qū)域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇，使其成為一種非常難以在結構上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性，制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品：（i）攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結構混合物的未經(jīng)處理的糖蛋白，（ii）用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產(chǎn)生裸核1結構，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產(chǎn)生單個GalNAc殘基， 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應中處理三個樣品（圖1）。作為比較，SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應中，以將Fc區(qū)與大多數(shù)C端糖肽分離，以促進其表征。陜西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)依那西普是一種 Fc 融合蛋白，具有高度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物。Genovis的SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶。 Genovis的SialEXO 2-3凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在500個單位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 與唾液酸酶混合物 SialEXO 相比，SialEXO 2-3 是一種 α2-3 特異性唾液酸酶，允許對 α2-3 連接的唾液酸進行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內實現(xiàn)。

genvois的OpeRATOR 是一種內切蛋白酶，可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內切蛋白酶具有高特異性，可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖，并且該酶不會用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3，但程度要低得多。為了獲得z佳性能，需要去除唾液酸，因此，SialEXO凍干（唾液酸酶混合物）包含在購買中。 上海倍篤生物涵蓋藥物研發(fā)的全流程，抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等。

GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率； 3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！將混合物加載到GlycOCATCH上，洗滌樹脂，并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后，在RP-LC-MS上分離樣品。數(shù)據(jù)顯示，糖苷酸肽的選擇性純化，攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集：IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。胰蛋白酶消化IgA后，將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上，并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集，具有不同程度的糖基化。用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中。北京瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成，每種唾液酸酶都具有獨特的活性，并且它們同時起作用。河南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

GlycOCATCH用于純化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于無活性的Genovis的OpeRATOR?酶，該酶經(jīng)過工程改造，可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特異性富集；2. 可靠 - 高親和力結合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要輔助因子或特殊緩沖液。GalNAcEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達，帶有His標簽，分子量為52 kDa。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程； 4. 即用型 - 只需加水即可！用于水解糖蛋白上GalNAc殘基的凍干酶。Genovis的GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。河南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究