山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應(yīng)過程中，從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無損，可用于進(jìn)一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)的異質(zhì)性，使游離的糖分析成為可能，并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達(dá)，該重組基因來源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產(chǎn)。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖：依那西普是一種融合蛋白，由TNF受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質(zhì)在Fc區(qū)域上方含有多達(dá)13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇，使其成為一種非常難以在結(jié)構(gòu)上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性，制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品：（i）攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu)混合物的未經(jīng)處理的糖蛋白，（ii）用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產(chǎn)生裸核1結(jié)構(gòu)，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產(chǎn)生單個GalNAc殘基， 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應(yīng)中處理三個樣品（圖1）。作為比較，SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進(jìn)行分析。FabRICATOR被包括在反應(yīng)中，以將Fc區(qū)與大多數(shù)C端糖肽分離，以促進(jìn)其表征。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶而用其他巖藻糖酶處理部分去除巖藻糖或根本沒有去除。

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相關(guān)法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等，致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù)，以期與客戶共同協(xié)作，加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度，為客戶提供更多價值。

與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物，可快速有效地去除抗體、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和簡單的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于減少異質(zhì)性，以促進(jìn)蛋白質(zhì)的分析，例如質(zhì)譜法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-連接聚糖的快速高效去糖基化；即用型離心柱形式 - 無酶干擾分析；與LC-MS兼容。與PNGase F類似，Genvois的與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常見的粘蛋白型 O-糖所需的酶，即單唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 （α-GalNAc）。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分：PNGase?F；O-糖苷酶。OmniGLYZOR特點(diǎn)：與LC-MS兼容；完全去除聚糖，改進(jìn)蛋白的分析；

與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括：OmniGlyZOR 微離心柱；PNGase F 凍干；RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性，否則某些 N-糖基化位點(diǎn)很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進(jìn)行O-糖位點(diǎn)特異性消化：對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點(diǎn)的簡單底物蛋白，OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點(diǎn)。 使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。福建凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶

固定形式可提高酶與底物的比率，快速去糖基化。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

genovis的FucosEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性，使其與大多數(shù)樣品相容。此外，F(xiàn)ucosEXO活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子，如BSA。根據(jù)底物的性質(zhì)，F(xiàn)ucosEXO 可在 1 至 2 小時內(nèi)水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 連接的巖藻糖殘基，而對于非常復(fù)雜的樣品可能需要更長的孵育時間。FucoseEXO也可固定在離心柱中，可快速方便地處理高達(dá)0.5mg的糖蛋白。使用離心柱形式，將糖蛋白樣品與固定化的FucosEXO樹脂一起孵育，然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis