河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡(jiǎn)單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括：OmniGlyZOR 微離心柱；PNGase F 凍干；RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性，否則某些 N-糖基化位點(diǎn)很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對(duì)EPO進(jìn)行O-糖位點(diǎn)特異性消化：對(duì)于jin攜帶一個(gè)或幾個(gè) O-糖基化位點(diǎn)的簡(jiǎn)單底物蛋白，OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點(diǎn)。 OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

Genvis測(cè)試去除唾液酸以揭示電荷變體：唾液酸是帶負(fù)電荷的糖殘基，存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會(huì)使分析工作流程復(fù)雜化，從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. 樣品中不含酶。因此，唾液酸的去除有助于研究蛋白質(zhì)中的潛在變體。該應(yīng)用展示了一種快速簡(jiǎn)便的樣品制備方法，可在電荷異構(gòu)體分析之前去除所有唾液酸。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的FucosEXO酶；

我們測(cè)量了FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO可有效釋放α1-2、α1-3和α1-4連接的巖藻糖，對(duì)α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活Genovis的FucosEXO的底物特異性：巖藻糖以不同的鍵存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖常見于 O-聚糖中，并作為 N-聚糖的天線巖藻糖基化，而 α1-6 連接的巖藻糖被發(fā)現(xiàn)是 N-聚糖he心的修飾。β1-3,4半乳糖的水解：Genovis的GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。

水解O-聚糖的酶不會(huì)從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR色譜柱只能在天然條件下使用的原因。 OmniGLYZOR 試劑盒 Microspin 以含有足夠材料的試劑盒形式提供，可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-連接聚糖的快速高效；與LC-MS兼容；完全去除聚糖，改進(jìn)基礎(chǔ)蛋白的分析；固定形式可提高酶與底物的比率，從而實(shí)現(xiàn)快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶分別購自Genovis(馬薩諸塞州，美國(guó))。用于水解糖蛋白上N-聚糖的凍干酶。Genovis的PNGase F 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。倍篤生物代理多條產(chǎn)品線，用于聚糖分析用酶、ADC偶聯(lián)技術(shù)、QED抗體對(duì)、AAV中和抗體、IdeS蛋白酶等。

genovis的FucosEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性，使其與大多數(shù)樣品相容。此外，F(xiàn)ucosEXO活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子，如BSA。根據(jù)底物的性質(zhì)，F(xiàn)ucosEXO 可在 1 至 2 小時(shí)內(nèi)水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 連接的巖藻糖殘基，而對(duì)于非常復(fù)雜的樣品可能需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間。FucoseEXO也可固定在離心柱中，可快速方便地處理高達(dá)0.5mg的糖蛋白。使用離心柱形式，將糖蛋白樣品與固定化的FucosEXO樹脂一起孵育，然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GalactEXO酶。海南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

GalactEXO微離心柱經(jīng)過格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應(yīng)條件在一小時(shí)內(nèi)有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當(dāng)加入RapiGest?并在變性條件下進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內(nèi)完全去除，PNGase F固定化15分鐘內(nèi)完全去除。在變性反應(yīng)條件下，PNGase F 在 30 分鐘內(nèi)成功將更復(fù)雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應(yīng)條件，將常用的糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)品RNase B在10或15分鐘內(nèi)完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究