廣東IdeS蛋白酶抗體酶切

對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說，Fab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰(zhàn)性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1，在足夠溫和的還原條件下保留鏈內和鏈間二硫鍵，從而產生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白，消化通常在鉸鏈上方獲得，但融合伴侶的結構和氨基酸序列可能導致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖，Fc 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時，并通過 HPLC 進行分析。Genovis的FabRICATOR MagIC可用于自動分析和監(jiān)測不同的CQA。廣東IdeS蛋白酶抗體酶切

一些應用（如結合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質 F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對于兔 IgG，請咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過 SDS-page 進行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過降低 pH 值，然后立即調整回中性 pH 值，一步洗脫結合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時吉林FabULOUSIdeS蛋白酶Genovis的內切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC，但降低復雜性并提高分辨率。

大多數zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架，雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性，例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性，它在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并產生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性，通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實現了完全消化，包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗證了其在生物制藥開發(fā)中的用途。

LC-MS中級分析是一種被大眾接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。它有助于理解多種關鍵質量屬性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端賴氨酸剪切。這種關于翻譯后修飾（PTM）的詳細知識是生物制藥開發(fā)和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色譜柱，可快速進行單克隆抗體的柱上酶切，并產生一致的亞基。該色譜柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在鉸鏈下方快速且特異性地消化IgG，產生F（ab'）2和Fc片段，而不會出現任何過度消化的風險。為了減少樣品處理并為樣品制備提供自動化解決方案，FabRICATOR被共價固定在樹脂上，并裝在適用于HPLC的PEEK色譜柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色譜柱，只需稍作修改，即可使用標準HPLC-MS裝置自動生成抗體亞基。然后，FabRICATOR HPLC色譜柱上消解產生的亞基被捕獲在在線連接的反相（RP）色譜柱的柱頭上。Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，滿足他們的需求。

抗體由于其大小和復雜性，是一種難以表征的分子。偶聯(lián)藥物有效載荷是對抗Ai癥等疾病的一種有吸引力的方法，但進一步增加了異質性的復雜性和風險。抗體藥物偶聯(lián)物 （ADC） 需要像任何其他基于 IgG 的生物制藥一樣進行仔細和詳細的表征，并且需要適當的分析工作流程。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶將ADC消化成其亞基，可以詳細表征這類復雜的藥物。Genovis的內切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC，但降低復雜性并提高分辨率。可使用FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。江蘇IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標準方法，并為產品質量屬性提供特定領域的信息。廣東IdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法，這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進，在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析，或者在工藝開發(fā)或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時，例如克隆篩選，工藝開發(fā)和驗證以及穩(wěn)定性研究，這是非常好的。 此外，Genovis產品的效率、健壯性（Robust）和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作，而且，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產品很好地支持這種類型的工作，這也促使Genovis不斷推出新產品和現有產品的不同形式，以支持客戶的工作。廣東IdeS蛋白酶抗體酶切