海南GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

當(dāng)你應(yīng)用像肽圖這樣的方法時，你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了。一個主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個氨基酸。然而，中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優(yōu)勢，因?yàn)樾枰治龅纳V峰要少得多，數(shù)據(jù)處理任務(wù)要簡單得多。此外，在中級實(shí)驗(yàn)中，手工實(shí)驗(yàn)步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進(jìn)行優(yōu)化。一旦在氨基酸水平上進(jìn)行了PTM表征，我們非常認(rèn)為中級表征肽圖的一種補(bǔ)充方法，可以在更常規(guī)的基礎(chǔ)上應(yīng)用。中級分析更適用于高通量或監(jiān)測類型的方法，并可用于支持肽圖分析。Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb，使用LC-MS進(jìn)行中級分析。海南GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發(fā)的目的，并隨時準(zhǔn)備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應(yīng)用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的旋轉(zhuǎn)柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對于更多的制備應(yīng)用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強(qiáng)大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵，如果片段想用于結(jié)合研究，這一點(diǎn)尤為重要，因?yàn)榻Y(jié)合效率和免疫反應(yīng)性將被保留。陜西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)用于抗體療法（如mAb、ADC和Fc融合蛋白）的表征、質(zhì)量控制、生產(chǎn)監(jiān)測。

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點(diǎn))以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實(shí)使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發(fā)，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質(zhì)量實(shí)驗(yàn)長太多的時間內(nèi)獲得更多關(guān)于分子的信息。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結(jié)果良好。并且應(yīng)該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強(qiáng)度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進(jìn)行一些優(yōu)化。

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實(shí)了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標(biāo)準(zhǔn)方法，并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息。

與IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個特定位點(diǎn)消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價Fab片段以及IgA的中級分析，從而促進(jìn)IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中。獨(dú)特的酶促工具，可實(shí)現(xiàn)IgA的中級表征和質(zhì)量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個消化位點(diǎn)。Genovis的GingisKHAN 可以消化單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白。海南GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

FabRICATOR（IdeS）酶是生物制藥行業(yè)中普遍使用的工具。海南GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個特定位點(diǎn)消化人IgA1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內(nèi)完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風(fēng)險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性?；钚允窃?7°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時間進(jìn)行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1。海南GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切