tetrametrylrhodarnineisothiocyante,TRITC)是一種紫紅色粉末,較穩(wěn)定,是羅達(dá)明(rhodamine)的衍生物。更大吸收光譜550urn,更大發(fā)射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發(fā)射的黃綠色熒光對(duì)比鮮明,常用于雙標(biāo)記染色。按照抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合步聚,免疫熒光法可分為以下三種。1.直接法用熒光素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)的抗原結(jié)合,以檢查出相應(yīng)的抗原成分。2.間接法先用特異性抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合,洗去未結(jié)合的抗體,再用熒光素標(biāo)記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結(jié)合,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復(fù)合物。在此復(fù)合物上帶有比直接法更多的熒光抗體,所以,此法較直接法靈敏。3.補(bǔ)體法用特異性的抗體和補(bǔ)體的混合液與標(biāo)本上的抗原反應(yīng),補(bǔ)體就結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上,再用抗補(bǔ)體的熒光抗體與之相結(jié)合,就形成了抗原一抗體一補(bǔ)體一抗補(bǔ)體熒光抗體的復(fù)合物。熒光顯微鏡下所見到的發(fā)出熒光的部分即是抗原所在的部位。補(bǔ)體法具有敏感性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì),同時(shí)適用于各種不同種屬來源的特異性抗體的標(biāo)記顯示,在各種不同種屬動(dòng)物抗體的檢測(cè)上為更常用的技術(shù)方法熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱。D-熒光素也常用于身體的外部研究。鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽
可用于需要低檢測(cè)限的測(cè)定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,簡單且均一的生物發(fā)光測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),可通過氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),產(chǎn)***光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,產(chǎn)生480nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似。徐州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。
D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活題成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位腫大的瘤模型,之后注入熒光素底物,通過IVIS系統(tǒng)來檢測(cè)光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。注:在抗腫大的瘤藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小,受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評(píng)價(jià)腫大的瘤生長,在抗腫大的瘤藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長。D-熒光素也常用于體外研究。
通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè)。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
附錄ⅧB),與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對(duì)照液比較,不得更濃()。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過%(附錄ⅧL)。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,加稀鹽酸2ml,搖勻,濾過,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,點(diǎn)于濾紙上,即生成黃色斑點(diǎn),趁濕置溴蒸氣中,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,用大量的水稀釋后仍極明顯;但加酸使成酸性后,熒光即消失;再加堿使成堿性,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ)。6含量測(cè)定編輯取本品約,精密稱定,加水20ml溶解后,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,合并提取液,用水10ml洗滌,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,合并提取液,置105℃恒重的容器中,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,精密稱定,殘?jiān)亓颗c相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,無氣味,有吸濕性;易溶于水,溶液呈黃紅色,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司怎么樣?揚(yáng)州游離酸D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期
D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù)。鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報(bào)告基因一起,為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外,pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上,通過生物信息學(xué)和合成方法,實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎(chǔ)上,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵。此后。鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽
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