按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗?)對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無(wú)鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測(cè)。7)為了您的安全和健康。D-熒光素鉀鹽的測(cè)試方法有哪幾種?鎮(zhèn)江熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽濃度
Q:熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢(shì)?Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍,便于數(shù)值分析比較,不需要熒光顯微鏡,而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,同時(shí)由于沒(méi)有內(nèi)源活性、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行失蹤定位,并且其觀測(cè)不需裂解細(xì)胞,方便進(jìn)行適時(shí)觀察。Q:海腎熒光素酶和螢火蟲(chóng)熒光素酶相比,相對(duì)活性如何?在氧、鎂和ATP的存在下,螢火蟲(chóng)熒光素酶作用于甲蟲(chóng)熒光素,而來(lái)源于海洋腔腸(Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報(bào)告基因技術(shù)(Dual-reporterassays),結(jié)合了螢火蟲(chóng)熒光素酶測(cè)試和海腎熒光素酶測(cè)試。Q:雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來(lái)是什么原因?轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善,首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的,通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞,另外陽(yáng)性對(duì)照您可以選擇過(guò)表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,更好是先酶切驗(yàn)證。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果很靈敏,有一定差異是正常的,通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善,一是記住保持樣本的均一性。徐州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。
或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射。4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin)只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2)注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。
在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無(wú)需培養(yǎng)過(guò)程,操作簡(jiǎn)便、靈敏度高,數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果,具有其它微生物檢測(cè)方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),是目前檢測(cè)微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲(chóng)和幾種其它甲蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲(chóng)熒光酶/熒光素。通過(guò)中間體dioxetanone介導(dǎo)作用,熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲(chóng)熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個(gè)反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰,當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下,發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系。螢火蟲(chóng)熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物,作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)簽。與HRP和堿性磷酸酶相比,熒光素酶不耐化學(xué)修飾。這個(gè)酶的一個(gè)特殊的優(yōu)點(diǎn)是,除了高靈敏度外,在哺乳動(dòng)物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個(gè)重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測(cè)污染,因?yàn)楫a(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對(duì)食品表面的檢測(cè),無(wú)論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物。南京D-熒光素鉀鹽測(cè)試公司哪家便宜。
熒光素也就是FDAFDA可透過(guò)細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和530nm。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù)?連云港ATPD-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)
D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長(zhǎng)是多長(zhǎng)?鎮(zhèn)江熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽濃度
短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。作者:思存鏈接:zhuanlan./p/來(lái)源:知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。高斯熒光素酶近年來(lái),其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光。來(lái)自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái)。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(#AAT-12530)使用專有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度。鎮(zhèn)江熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽濃度
南京翌科生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),是一家其他型公司。公司自成立以來(lái),以質(zhì)量為發(fā)展,讓匠心彌散在每個(gè)細(xì)節(jié),公司旗下外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑深受客戶的喜愛(ài)。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí),遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務(wù)服務(wù)行業(yè)的發(fā)展。翌科生物立足于全國(guó)市場(chǎng),依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力,融合前沿的技術(shù)理念,飛快響應(yīng)客戶的變化需求。