無錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度

來源: 發(fā)布時間:2022-06-01

    是新型底物開發(fā)的一個早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子(19kDa)單體酶,具有獨(dú)特的底物,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景,為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項(xiàng)針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)??蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個氨基酸的小標(biāo)簽和一個更大,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測試怎么樣?無錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個小時,只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,持續(xù)發(fā)光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,約3h后熒光素排除,發(fā)光全部消失,更佳檢測時間是在注射后15~35min之間;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,擴(kuò)散快,但發(fā)光持續(xù)時間很短??蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時間的間隔沒有更短限制,只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程。6-羧基熒光素二乙酸酯做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司?

    附錄ⅧB),與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對照液比較,不得更濃()。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過%(附錄ⅧL)。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,加稀鹽酸2ml,搖勻,濾過,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,點(diǎn)于濾紙上,即生成黃色斑點(diǎn),趁濕置溴蒸氣中,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,用大量的水稀釋后仍極明顯;但加酸使成酸性后,熒光即消失;再加堿使成堿性,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ)。6含量測定編輯取本品約,精密稱定,加水20ml溶解后,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,合并提取液,用水10ml洗滌,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,合并提取液,置105℃恒重的容器中,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,精密稱定,殘?jiān)亓颗c相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,無氣味,有吸濕性;易溶于水,溶液呈黃紅色,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,是新型底物開發(fā)的一個早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,即NanoLuc?螢光素酶。D-熒光素鉀鹽長期保存是有效期一年。

    luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusoleariu')或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyrali')。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。南京D-熒光素鉀鹽活題成像

熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。無錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度

    螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,并啟動了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時的人們認(rèn)為,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點(diǎn),可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個月后,***代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù)。隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng)。無錫游離酸D-熒光素鉀鹽濃度

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