室溫培育30min后加入細(xì)胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細(xì)胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細(xì)胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時(shí)加入實(shí)驗(yàn)確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細(xì)胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時(shí)用LuciferaseAs-sayAystem檢測(cè)熒光素酶活性。檢測(cè)時(shí)，各克隆按1×105個(gè)/孔接種到24孔板，24h后細(xì)胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個(gè)克隆設(shè)3個(gè)復(fù)孔，保留RLU值高的細(xì)胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè)。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個(gè)克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細(xì)胞克隆的熒光值檢測(cè)7-luc陽性克隆細(xì)胞按細(xì)胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細(xì)胞，一組只有培養(yǎng)基作對(duì)照，設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽測(cè)試價(jià)格。ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
但是上一次底物的殘留曲線可以知道，可以控制對(duì)下一次觀察結(jié)果的影響。儲(chǔ)存與運(yùn)輸一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運(yùn)輸放在4℃環(huán)境。建議現(xiàn)用現(xiàn)配，D熒光素鉀鹽在液體中容易降解。應(yīng)用領(lǐng)域腫大的瘤，干細(xì)胞，藥物開發(fā)，基因治的好，轉(zhuǎn)基因小鼠，免疫學(xué)等等。英文名字firefly.中文名稱熒光素酶，重組熒光素貨號(hào)AAT-12500規(guī)格￥1430/1mL背景資料：熒光素酶是來自北美螢火蟲（Photinuspyralis）中熒光素酶基因的克隆和重組表達(dá)，它為實(shí)驗(yàn)研究或者用生物熒光試劑制備試劑盒檢測(cè)ATP或者熒光素底物提供了可信度和可靠性。這種重組酶可以克服由天然資源純化獲得熒光素酶時(shí)受季節(jié)和地方區(qū)域變化的影響。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。產(chǎn)品形式提供的熒光素酶*重組熒光素*產(chǎn)品為溶液形式。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽應(yīng)用南京地區(qū)有哪些做D-熒光素鉀鹽測(cè)試的公司。
Q：熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢(shì)？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時(shí)由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行失蹤定位，并且其觀測(cè)不需裂解細(xì)胞，方便進(jìn)行適時(shí)觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對(duì)活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報(bào)告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測(cè)試和海腎熒光素酶測(cè)試。Q：雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對(duì)照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗(yàn)證。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測(cè)樣品中的微生物含量。APT熒光檢測(cè)儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測(cè)。1970年，科學(xué)家***次測(cè)定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu)；1985年，科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因，并在大腸桿菌中表達(dá)，從而得到了具有活性的熒光素酶；1986年，科學(xué)家們測(cè)定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后，各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功，熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前，熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中，再注入熒光素，使*細(xì)胞發(fā)光，通過探測(cè)熒光，就能監(jiān)測(cè)*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理，用這種方法能對(duì)致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究，對(duì)某些疾病進(jìn)行診斷，監(jiān)測(cè)疫苗、藥物和治療方法的效力。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜。
螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測(cè)裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后，加入6孔板中，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，死亡更低的G418濃度，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF－7細(xì)胞，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在250μl無血清、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻。D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長(zhǎng)是多長(zhǎng)？ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著***的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合，重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號(hào)江蘇生命科技園F7棟301-3室，是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ)，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線，包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國產(chǎn)試劑自主研發(fā)，服務(wù)全國各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司。翌科生物深耕行業(yè)多年，始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁?**的外泌體提取，非編碼RNA試劑，檢測(cè)試劑，轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物始終以本分踏實(shí)的精神和必勝的信念，影響并帶動(dòng)團(tuán)隊(duì)取得成功。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)市場(chǎng)，以敏銳的市場(chǎng)洞察力，實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。