而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。熒光素酶報告基因(Luc)是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶,哺乳細胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶。細菌熒光素酶對熱敏感,因此在哺乳細胞的應用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高,檢測線性范圍寬達7~8個數(shù)量級,是更常用于哺乳細胞的報道基因,用熒光比色計即可檢測酶活性,因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應用,無需裂解細胞即可檢測酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔(coelenterazine)氧化,產(chǎn)物可透過生物膜,可能是更適用于活細胞的報告分子。將熒光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染到細胞中。D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析。鎮(zhèn)江游離酸D-熒光素鉀鹽試劑
包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。3)腹腔注射(.)?;窗睤-熒光素鉀鹽公司D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司。
故根據(jù)熒光反應的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年,科學家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構;1985年,科學家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達,從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術已經(jīng)廣泛應用到醫(yī)學、生命科學、環(huán)境科學、微生物學等許多領域。以醫(yī)學領域為例,**們將熒光素酶基因嵌入到*細胞中,再注入熒光素,使*細胞發(fā)光,通過探測熒光,就能監(jiān)測*細胞的擴散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對致病基因、***免疫機制等進行研究,對某些疾病進行診斷,監(jiān)測疫苗、藥物和治療方法的效力。
短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。作者:思存鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權,非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。高斯熒光素酶近年來,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因為這些報告基因較小,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),可通過氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達后可有效地從哺乳動物細胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒(#AAT-12530)使用專有的發(fā)光配方來定量細胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當該試劑與高斯熒光素酶相互作用時,產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報告基因測定試劑盒特點:提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度。D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎?
其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應化學反應中,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物。D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司?間接免疫熒光試劑盒
D-熒光素鉀鹽的測試方法有哪幾種?鎮(zhèn)江游離酸D-熒光素鉀鹽試劑
附錄ⅧB),與標準硫酸鉀溶液制成的對照液比較,不得更濃()。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過%(附錄ⅧL)。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,加稀鹽酸2ml,搖勻,濾過,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,點于濾紙上,即生成黃色斑點,趁濕置溴蒸氣中,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,斑點即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強烈的熒光,用大量的水稀釋后仍極明顯;但加酸使成酸性后,熒光即消失;再加堿使成堿性,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(附錄Ⅲ)。6含量測定編輯取本品約,精密稱定,加水20ml溶解后,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,合并提取液,用水10ml洗滌,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,合并提取液,置105℃恒重的容器中,在水浴上通風蒸發(fā)至干,殘渣用乙醇10ml溶解后,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,精密稱定,殘渣重量與相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機化合物,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,無氣味,有吸濕性;易溶于水,溶液呈黃紅色,并帶極強的黃綠色熒光。鎮(zhèn)江游離酸D-熒光素鉀鹽試劑
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