GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲(chóng)，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲(chóng)熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術(shù)簡(jiǎn)介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測(cè)量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移以及對(duì)藥物的反應(yīng)。在藥效學(xué)評(píng)價(jià)方面，熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動(dòng)物水平上進(jìn)行長(zhǎng)期療效跟蹤觀察。利用無(wú)創(chuàng)傷活題成像對(duì)哎細(xì)胞生長(zhǎng)的檢測(cè)，可對(duì)哎癥治的好之前和過(guò)程中的哎細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光，不需要激發(fā)光，但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素，約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素。D-熒光素鉀鹽檢測(cè)的安全性如何保障？徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對(duì)活性。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用，將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子，可分析轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)是否提高熒光素酶活性。d.可以分析信號(hào)通路是否***，將該信號(hào)通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報(bào)告基因載體，在不同上游信號(hào)條件下，熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng)。例如在GPCR研究中，將cAMPresponseelement（CRE）載入報(bào)告基因載體，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選。又如，將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報(bào)告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，可以用于低氧相關(guān)通路的研究。e.驗(yàn)證microRNA的靶序列，將待測(cè)的3’UTR序列插入報(bào)告基因載體，再共轉(zhuǎn)入該microRNA，如果熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列。Q：在[信諾金達(dá)]做熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)，需要提供什么？實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括哪些？您需要提供：1.基因序列或模板，需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因或microRNA信息；2.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，[信諾金達(dá)]默認(rèn)為使用293T細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，[信諾金達(dá)]會(huì)為您提供實(shí)驗(yàn)流程及完整報(bào)告一份，包括實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)、圖片、分析結(jié)果等。揚(yáng)州熒光素酶D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)D-熒光素鉀鹽測(cè)試適用范圍包括哪些？
LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開(kāi)了序幕。LAR與螢火蟲(chóng)螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起，為研究人員開(kāi)始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過(guò)允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲(chóng)螢光素酶基因，luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來(lái)被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上，通過(guò)生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲(chóng)螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱(chēng)為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開(kāi)發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵。此后，通過(guò)開(kāi)發(fā)新的方法來(lái)改變螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理。
螢光素酶（英文名稱(chēng)：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱(chēng)，其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的螢光素酶，螢火蟲(chóng)發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期，這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺(tái)。1991年，Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品，并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃，通過(guò)持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega***提出螢火蟲(chóng)螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為，螢火蟲(chóng)螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡(jiǎn)單的檢測(cè)流程等特點(diǎn)，可能會(huì)對(duì)分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個(gè)月后，***代螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測(cè)試劑在Promega誕生，使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù)。隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)。D-熒光素鉀鹽檢測(cè)是個(gè)人合作嗎？
是新型底物開(kāi)發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開(kāi)發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲(chóng)或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。D-熒光素鉀鹽的使用說(shuō)明。gluc熒光素酶
D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。2）用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射。4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetleluciferin）只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2）注射方式、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè)，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ)，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線，包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā)，服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司，是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售為一體的專(zhuān)業(yè)化公司。翌科生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專(zhuān)業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì)，以高度的專(zhuān)注和執(zhí)著為客戶提供外泌體提取，非編碼RNA試劑，檢測(cè)試劑，轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心，為用戶帶來(lái)良好體驗(yàn)。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求，提高產(chǎn)品價(jià)值，是我們前行的力量。