每孔加入100μl養(yǎng)24h后,Luciferin使其終濃度為150μg/ml,PBS,再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測(cè),分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對(duì)照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞,接種于24孔板,接種密度為2×104/孔。細(xì)胞接種后1~7d,每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長(zhǎng)天數(shù)為橫坐標(biāo),細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),分別繪制兩種細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。二.動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,4~5周齡,體重(15±2)g,雌雄各3只。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7用PBS重懸為2.5×10/ml懸液,每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,共接種6只。接種后第5d采用德國(guó)BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度。以后每5d觀測(cè)一連續(xù)觀測(cè)30d。觀測(cè)前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉(計(jì)量為:35mg/kg體重),按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin(invivograde),10min后,進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長(zhǎng)情況,定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長(zhǎng)曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d,脫頸處死小鼠,取腫大的瘤組織,制成石蠟切片,切片厚度為3μm。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試找哪家公司?淮安熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)
包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析;高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無(wú)毒性,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸;短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析。2.活題成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.)。南通螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鉀鹽測(cè)試方法是體外生物發(fā)光檢測(cè)。
我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過(guò)結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。螢光素酶(英語(yǔ):Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。
通過(guò)開發(fā)新的方法來(lái)改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè)。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化。通過(guò)將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜。
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測(cè)樣品中的微生物含量。APT熒光檢測(cè)儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測(cè)。1970年,科學(xué)家***次測(cè)定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu);1985年,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá),從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學(xué)家們測(cè)定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,再注入熒光素,使*細(xì)胞發(fā)光,通過(guò)探測(cè)熒光,就能監(jiān)測(cè)*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,用這種方法能對(duì)致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,對(duì)某些疾病進(jìn)行診斷,監(jiān)測(cè)疫苗、藥物和治療方法的效力。D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析。連云港熒光素D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存
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其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物?;窗矡晒馑剽淃}D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)
南京翌科生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),是一家其他型公司。翌科生物致力于為客戶提供良好的外泌體提取,非編碼RNA試劑,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑,一切以用戶需求為中心,深受廣大客戶的歡迎。公司從事商務(wù)服務(wù)多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計(jì)、強(qiáng)大的技術(shù),還有一批專業(yè)化的隊(duì)伍,確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。在社會(huì)各界的鼎力支持下,持續(xù)創(chuàng)新,不斷鑄造***服務(wù)體驗(yàn),為客戶成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。