產(chǎn)品簡(jiǎn)介：在細(xì)胞體外培養(yǎng)工作中，為了達(dá)到長(zhǎng)期保存細(xì)胞的生物活性的目的，須將細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存，并在實(shí)驗(yàn)需要的時(shí)候?qū)⑵渲匦聫?fù)蘇和培養(yǎng)。目前，細(xì)胞凍存更常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用添加適量保護(hù)劑使細(xì)胞緩慢降溫至指定溫度范圍，從而到達(dá)保護(hù)細(xì)胞的目的。EKBIOTech無(wú)血清細(xì)胞凍存液是EKBIO技術(shù)團(tuán)隊(duì)在長(zhǎng)期的細(xì)胞研究過(guò)程中針對(duì)細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，面向數(shù)百種細(xì)胞研發(fā)出的特點(diǎn)使用凍存液產(chǎn)品。該產(chǎn)品添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑，可延緩細(xì)胞在凍存過(guò)程中的沉降速率，防止細(xì)胞互相擠壓，影響細(xì)胞凍存效果。另外，添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑、滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過(guò)程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能極大降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷，有效提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。該產(chǎn)品配方成分明確，不含血清、不含動(dòng)物源性蛋白，可減少各類(lèi)細(xì)菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細(xì)胞的安全；574d075a-6771-4443-9ef3-0ba適用于常規(guī)細(xì)胞系、原代細(xì)胞，同時(shí)亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。與傳統(tǒng)凍存液相比。無(wú)血清細(xì)胞凍存液測(cè)試需要哪些必備條件？上海通用型細(xì)胞凍存液溶液怎么保存
從上述的一些保存方式來(lái)看，無(wú)血清的細(xì)胞凍存液具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)，具有非常明顯的通用性，而且在保存細(xì)胞的過(guò)程中比較簡(jiǎn)單，不用切換保存的環(huán)境，所以對(duì)于細(xì)胞的保存可以更加的安全、高效。而且無(wú)血清細(xì)胞凍存液避免了細(xì)胞產(chǎn)生大量的死亡，存活率比較高。目前，細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍，細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶，從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高，pH值改變，部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性，引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂，溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶，使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞，線(xiàn)粒體腫脹，功能丟失，并造成能量代謝障礙。胞膜上的類(lèi)脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變，使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多，隨冷凍溫度的降低，冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷，而致細(xì)胞死亡。因此，細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。通常采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護(hù)劑（滲透型），這兩種物質(zhì)分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞，可以使冰點(diǎn)下降。南通內(nèi)皮細(xì)胞凍存液配制比例100ml無(wú)血清細(xì)胞凍存液儲(chǔ)存條件是2-8℃下12 個(gè)月。
不含血清及動(dòng)物來(lái)源性蛋白，能減少各類(lèi)病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全成分明確，批次間差異小既適用于一般細(xì)胞的凍存，也適用于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞的凍存無(wú)需程序降溫，可直接放置-80℃冰箱長(zhǎng)期凍存，操作簡(jiǎn)單可培養(yǎng)板整板凍存，例如雜交瘤細(xì)胞的凍存，省時(shí)高效。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長(zhǎng)期保存的常用方法，其中細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，不僅更是說(shuō)只是用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的保存，在細(xì)胞的購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等，從而引起細(xì)胞死亡。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護(hù)劑，在凍存細(xì)胞時(shí)將細(xì)胞懸浮于凍存液中，可使冰點(diǎn)降低，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞，可以防止或減少冷凍冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。這樣就使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，在需要時(shí)直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細(xì)胞活性。傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合。
如果想要達(dá)到這樣的目的，那么就需要細(xì)胞冷卻液，這種東西怎樣配置呢?下面就來(lái)具體的了解一下，細(xì)胞凍存液的配方是什么？(一)細(xì)胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);4.離心1000rpm，5min;5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml;6.將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間及操作者;8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。space(二)細(xì)胞復(fù)蘇1.從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。2.從37℃水浴中取出凍存管，打開(kāi)蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻;3.離心，1000rpm，5min;4.棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度。南京翌科生物科技有限公司的無(wú)血清細(xì)胞凍存液怎么樣？
并上下振蕩數(shù)次混勻。備注：為了盡量減少污染，未使用完的細(xì)胞凍存液**好凍回-20℃，反復(fù)凍融不影響使用效果。2.用細(xì)胞消化液將生長(zhǎng)良好的細(xì)胞消化成單細(xì)胞，并用細(xì)胞計(jì)數(shù)器或血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度。備注：懸浮細(xì)胞不需要消化但仍需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，不易消化成單細(xì)胞的各種293細(xì)胞等**好使用含有EDTA的胰酶進(jìn)行消化。3.用低速離心沉淀細(xì)胞，棄去上清。備注：通常2000~3000rpm離心5~10min即可。4.用適量細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞。備注：細(xì)胞濃度可根據(jù)情況調(diào)整為1~5×106/ml，通常為3×106/ml左右。5.按每管1ml分裝到細(xì)胞凍存管中。6.直接放入-70℃冰箱中凍存。備注：無(wú)需程序降溫盒或從4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁瑣程序降溫。。備注：對(duì)于不同細(xì)胞，使用本細(xì)胞凍存液也可在-70℃冰箱中保存數(shù)周甚至數(shù)月，但建議**好盡快轉(zhuǎn)入液氮中保存。8.復(fù)蘇方法同常規(guī)細(xì)胞凍存液。備注：對(duì)于大多數(shù)對(duì)DMSO不敏感的細(xì)胞，復(fù)蘇時(shí)甚至傳代前無(wú)需去除細(xì)胞凍存液，實(shí)際上本細(xì)胞凍存液中某些成分具有一定的促細(xì)胞生長(zhǎng)特性。可見(jiàn)，Quick-Freezing-M無(wú)血清細(xì)胞凍存液相對(duì)于含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)有：1.即用型，無(wú)需現(xiàn)配，直接將細(xì)胞懸浮于凍存液中即可2.通用型。無(wú)血清細(xì)胞凍存液運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸。蘇州細(xì)胞凍存液應(yīng)用
做無(wú)血清細(xì)胞凍存液真的靠譜嗎？上海通用型細(xì)胞凍存液溶液怎么保存
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域：，尤其涉及一種細(xì)胞凍存液，具體涉及一種用于干細(xì)胞的凍存液。背景技術(shù)：：臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤(pán)和臍帶中的血液，通常是廢棄不用的。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn)，臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統(tǒng)的造血干細(xì)胞，可用于造血干細(xì)胞移植，***80多種疾病。因此，臍帶血已成為造血干細(xì)胞的重要來(lái)源，特別是無(wú)血緣關(guān)系造血干細(xì)胞的來(lái)源。也是一種非常重要的人類(lèi)生物資源。干細(xì)胞***是將具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能的干細(xì)胞在體外培養(yǎng)后，再將其移植入患者受損或缺損組織中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)損傷組織的補(bǔ)充和修復(fù)。目前干細(xì)胞采集后，需要加入保存液進(jìn)行冷凍保存，細(xì)胞凍存液是細(xì)胞凍存過(guò)程中的**試劑，關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇后的活性及數(shù)量等問(wèn)題，現(xiàn)有的細(xì)胞凍存液，一方面營(yíng)養(yǎng)成分單一，配比不當(dāng)，導(dǎo)致細(xì)胞存活率低、穩(wěn)定性差；另一方面大多都是異種血清，會(huì)引入外源蛋白從而增加細(xì)胞污染和過(guò)敏的風(fēng)險(xiǎn)，不適用于臨床。因此，為有效開(kāi)展干細(xì)胞移植及建立干細(xì)胞庫(kù)，亟需開(kāi)發(fā)一種成本低、細(xì)胞存活率高、成分簡(jiǎn)單的細(xì)胞凍存液，對(duì)于生物醫(yī)學(xué)具有重要的研究與應(yīng)用價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。上海通用型細(xì)胞凍存液溶液怎么保存
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ)，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線(xiàn)，包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā)，服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶(hù)。的公司，是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售為一體的專(zhuān)業(yè)化公司。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ)，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線(xiàn)，包括外泌體提取與檢測(cè)試劑、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù)、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā)，服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶(hù)。的企業(yè)之一，為客戶(hù)提供良好的外泌體提取，非編碼RNA試劑，檢測(cè)試劑，轉(zhuǎn)染試劑。翌科生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路，既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng)，又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。翌科生物創(chuàng)始人金芳芳，始終關(guān)注客戶(hù)，創(chuàng)新科技，竭誠(chéng)為客戶(hù)提供良好的服務(wù)。