揚(yáng)州熒光素D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-25

    包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.)。D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸。揚(yáng)州熒光素D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    5)對(duì)于檢測靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測。7)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶,分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,同時(shí)近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶(Gaussluciferase)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光,常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。螢火蟲螢光素酶更通用和更常見的報(bào)告基因是北美螢火蟲photinuspyralis的熒光素酶,該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度(體內(nèi))甚至沒有毒性,可用于原核和真核細(xì)胞。運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸。上海熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù)。

    是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子(19kDa)單體酶,具有獨(dú)特的底物,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景,為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)??蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合。

    就可以用高敏感度的CCD相機(jī)對(duì)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行***觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如螢光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到。這就使得對(duì)包括***在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù),借由dNTP接上DNA鏈時(shí)水解放出的焦磷酸,透過另外一個(gè)硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng),螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光,機(jī)器借此探測光線并定序。螢光素酶也可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病。螢光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,例如,用于在轉(zhuǎn)染過螢光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平;這一技術(shù)被稱為報(bào)告基因檢測法或螢光素酶檢測法(LuciferaseAssay)。螢光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白,因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力。此外,螢光素酶水母素的發(fā)光強(qiáng)度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān),因此可用于檢測生物體內(nèi)的鈣。D-熒光素鉀鹽測試怎么樣?

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,Luciferin使其終濃度為150μg/ml,PBS,再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測,分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細(xì)胞生長曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對(duì)照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞,接種于24孔板,接種密度為2×104/孔。細(xì)胞接種后1~7d,每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長天數(shù)為橫坐標(biāo),細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),分別繪制兩種細(xì)胞生長曲線。二.動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,4~5周齡,體重(15±2)g,雌雄各3只。取對(duì)數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2.5×10/ml懸液,每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,共接種6只。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測信號(hào)強(qiáng)度。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉(計(jì)量為:35mg/kg體重),按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin(invivograde),10min后,進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況,定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d,脫頸處死小鼠,取腫大的瘤組織,制成石蠟切片,切片厚度為3μm。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少?揚(yáng)州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長

D-熒光素鉀鹽的使用說明。揚(yáng)州熒光素D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素運(yùn)輸和保存冰袋運(yùn)輸;-20℃干燥避光保存;有效期一年。使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),混勻。立即使用。揚(yáng)州熒光素D-熒光素鉀鹽應(yīng)用