2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；3）腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析。（對每只動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時(shí)間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO；后者易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。D-熒光素鉀鹽測試需要哪些必備條件？泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明
因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí)，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢，持續(xù)發(fā)光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn)，在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，更佳檢測時(shí)間是在注射后15~35min之間；若進(jìn)行熒光素靜脈注射，擴(kuò)散快，但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短。科研人員根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過程。熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測試公司。
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí)。由于半衰期短，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中，生長10-24小時(shí)（80%匯合度）。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測。8．加入底物，測定熒光素酶的活性。9．計(jì)算相對熒光強(qiáng)度，并與空載對照比較。
在食品衛(wèi)生領(lǐng)域由于ATP生物發(fā)光技術(shù)無需培養(yǎng)過程，操作簡便、靈敏度高，數(shù)分鐘內(nèi)可得到結(jié)果，具有其它微生物檢測方法無法比擬的優(yōu)勢，是目前檢測微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素。通過中間體dioxetanone介導(dǎo)作用，熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個(gè)反應(yīng)發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學(xué)熒光達(dá)到更高峰，當(dāng)熒光素和ATP都超量存在的條件下，發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關(guān)系。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結(jié)合形成偶聯(lián)物，作為免疫分析中用熒光素作為底物進(jìn)行檢測的標(biāo)簽。與HRP和堿性磷酸酶相比，熒光素酶不耐化學(xué)修飾。這個(gè)酶的一個(gè)特殊的優(yōu)點(diǎn)是，除了高靈敏度外，在哺乳動(dòng)物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個(gè)重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測污染，因?yàn)楫a(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對食品表面的檢測，無論是在加工制作工程中設(shè)備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物。D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸。
短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。高斯熒光素酶近年來，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小，并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì)，可通過氧氣催化腔腸素氧化，產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（#AAT-12530）使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí)，產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒特點(diǎn)：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度。D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。常州游離酸D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期
D-熒光素有時(shí)候也叫游離酸。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明
D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活題成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，構(gòu)建原位腫大的瘤模型，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價(jià)等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。注：在抗腫大的瘤藥物藥效評價(jià)試驗(yàn)中，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小，受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響，生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價(jià)腫大的瘤生長，在抗腫大的瘤藥效評價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中，建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長。D-熒光素也常用于體外研究。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明