其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常?？梢赃M一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長
重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進行蛋白質(zhì)相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究，我們將與LgBiT具有極強親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標簽，具有多種功能，例如當與基于CRIPSR的標簽一起使用時，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展，人們認識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長做D-熒光素鉀鹽測試哪個公司好？
后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運輸和保存運輸條件：4℃冰袋運輸；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。
因此只有在活細胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強度與標記細胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個小時，只有活細胞才能夠持續(xù)表達熒光素酶。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能。(2)熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。(3)熒光素在體內(nèi)擴散速度快，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進入動物體內(nèi)。腹腔注射擴散較慢，持續(xù)發(fā)光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達熒光素酶的細胞開始發(fā)光，10min后強度達到穩(wěn)定的更高點，在更高點持續(xù)約20~30min后開始衰減，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，更佳檢測時間是在注射后15~35min之間；若進行熒光素靜脈注射，擴散快，但發(fā)光持續(xù)時間很短。科研人員根據(jù)大量的實驗總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。(4)觀察時間的間隔沒有更短限制，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程。D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域？
luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進口，產(chǎn)品價格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本，一方面可以增強使用效果。作者：科遠迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個氨基酸構(gòu)成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株，當細胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達。基因、細胞和活題動物都可被熒光素酶基因標記。將標記好的細胞接種到實驗動物體內(nèi)后，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassiumsalt，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。D-熒光素鉀鹽檢測的安全性如何保障？鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長
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隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達調(diào)控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進展。此外，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進的例子后來被進一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上，通過生物信息學和合成方法，實現(xiàn)了更大的改進。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后。鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長