徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-11

    5)對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn),建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí),應(yīng)使用無(wú)鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測(cè)。7)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng),其中更有代表性的是來(lái)自螢火蟲(chóng)體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類(lèi)螢光素酶,分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,同時(shí)近年來(lái)研究得較多的來(lái)源于高斯氏菌的高斯熒光素酶(Gaussluciferase)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過(guò)程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),可通過(guò)熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光,常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。螢火蟲(chóng)螢光素酶更通用和更常見(jiàn)的報(bào)告基因是北美螢火蟲(chóng)photinuspyralis的熒光素酶,該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度(體內(nèi))甚至沒(méi)有毒性,可用于原核和真核細(xì)胞。運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸。D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存條件是-20℃干燥避光。徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽

    我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過(guò)結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱(chēng)為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。螢光素酶(英語(yǔ):Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng),其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類(lèi)使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。鎮(zhèn)江熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽應(yīng)用D-熒光素也常用于身體的外部研究。

    重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定;也可以和HiBiT一樣高,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過(guò)結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱(chēng)為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法。熒光素酶(英文名稱(chēng):Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱(chēng),其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。

    就可以用高敏感度的CCD相機(jī)對(duì)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行***觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如螢光探測(cè)器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測(cè)到。這就使得對(duì)包括***在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù),借由dNTP接上DNA鏈時(shí)水解放出的焦磷酸,透過(guò)另外一個(gè)硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng),螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光,機(jī)器借此探測(cè)光線并定序。螢光素酶也可以被用于檢測(cè)血庫(kù)中所存血液中的紅血球是否開(kāi)始破裂。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來(lái)檢測(cè)犯罪現(xiàn)場(chǎng)中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來(lái)發(fā)現(xiàn)特定的疾病。螢光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,例如,用于在轉(zhuǎn)染過(guò)螢光素酶的細(xì)胞中檢測(cè)特定啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平;這一技術(shù)被稱(chēng)為報(bào)告基因檢測(cè)法或螢光素酶檢測(cè)法(LuciferaseAssay)。螢光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白,因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過(guò)程中熱休克蛋白的保護(hù)能力。此外,螢光素酶水母素的發(fā)光強(qiáng)度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān),因此可用于檢測(cè)生物體內(nèi)的鈣。ATP作用下的D-熒光素鉀鹽什么樣。

    4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4?。D-熒光素鉀鹽合作需要交押金嗎?淮安專(zhuān)業(yè)做D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商

D-熒光素鉀鹽檢測(cè)是個(gè)人合作嗎?徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽

    產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見(jiàn)下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位**模型,之后注入熒光素底物,通過(guò)IVIS系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評(píng)價(jià)等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。注:在抗**藥物藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測(cè)需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小,受**生長(zhǎng)所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很***的評(píng)價(jià)**生長(zhǎng),在抗**藥效評(píng)價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,建議使用小動(dòng)物核磁成像系統(tǒng)檢測(cè)**生長(zhǎng)。D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析;高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO。 徐州螢火蟲(chóng)熒光素酶D-熒光素鉀鹽