這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著***的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合，重組為一個(gè)明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽生物公司
隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個(gè)樣本中依次檢測兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報(bào)告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后。上海熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽試劑ATP作用下的D-熒光素鉀鹽什么樣。
luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口，產(chǎn)品價(jià)格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本，一方面可以增強(qiáng)使用效果。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株，當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?；颉⒓?xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassiumsalt，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。
故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年，科學(xué)家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu)；1985年，科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因，并在大腸桿菌中表達(dá)，從而得到了具有活性的熒光素酶；1986年，科學(xué)家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后，各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功，熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前，熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中，再注入熒光素，使*細(xì)胞發(fā)光，通過探測熒光，就能監(jiān)測*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理，用這種方法能對致病基因、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究，對某些疾病進(jìn)行診斷，監(jiān)測疫苗、藥物和治療方法的效力。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣？
SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級(jí)純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實(shí)驗(yàn)（invivo）；3）高靈敏度ATP分析；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少？無錫熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析。徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽生物公司
2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素運(yùn)輸和保存冰袋運(yùn)輸；-20℃干燥避光保存；有效期一年。使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用。徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽生物公司