LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達調(diào)控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關鍵進展。此外，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進的例子后來被進一步應用到pGL4和luc2報告基因上，通過生物信息學和合成方法，實現(xiàn)了更大的改進。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關鍵。此后，通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進行檢測。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理。D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應用
是新型底物開發(fā)的一個早期實例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗，研究人員從蝦的螢光素酶改造設計出一種新型螢光素酶報告基因，即NanoLuc?螢光素酶。這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著范圍廣的應用前景，為進一步的技術開發(fā)奠定了基礎。[1]2015NanoBRET?技術NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項針對各種能量受體熒光基團的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關的一些挑戰(zhàn)。可將這些熒光基團添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進行活細胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標簽和一個更大，更精細的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補結(jié)合。南京專業(yè)做D-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。
從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應用：1）活細胞、組織或生物體內(nèi)luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達的成像分析；2）***用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2）用預熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配制工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基直至無殘留。4）圖像分析前立即向細胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析（或者細胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）。D-熒光素鉀鹽注：螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。
GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術簡介活題生物發(fā)光成像技術能夠讓研究人員直接快速的測量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及對藥物的反應。在藥效學評價方面，熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動物水平上進行長期療效跟蹤觀察。利用無創(chuàng)傷活題成像對哎細胞生長的檢測，可對哎癥治的好之前和過程中的哎細胞的變化進行實時觀測和評估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光，不需要激發(fā)光，但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素，約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。熒光素。D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎？
室溫培育30min后加入細胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時加入實驗確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn)。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性。檢測時，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板，24h后細胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個克隆設3個復孔，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細胞，一組只有培養(yǎng)基作對照，設置2個復孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。D-熒光素鉀鹽測試適用范圍包括哪些？鹽城ATPD-熒光素鉀鹽哪家好
D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應用
并實現(xiàn)了在非常高通量的應用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細胞健康的重要指標，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細胞活力，尤其是在高通量應用中。該檢測原理還促進了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應的保護基團偶聯(lián)，能對這些酶進行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學反應的進一步了解以及Promega生物學家和化學家團隊的建立，一種改進的luciferin面世，能更好地用于典型的報告基因檢測應用。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個早期實例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗，研究人員從蝦的螢光素酶改造設計出一種新型螢光素酶報告基因，即NanoLuc?螢光素酶。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽應用