可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快；③比CAT靈敏100倍；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí)。由于半衰期短，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累。相反，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下，可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測(cè)步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。3．篩選陽性克隆，測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照，提純備用。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中，生長(zhǎng)10-24小時(shí)（80%匯合度）。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè)。8．加入底物，測(cè)定熒光素酶的活性。9．計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度，并與空載對(duì)照比較。D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測(cè)。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測(cè)中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)：該測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測(cè)量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測(cè)所必不可少的組分各類螢光素酶底物，輔因子和物理特性：近幾十年來，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展，已經(jīng)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和生物量計(jì)數(shù)等方面廣泛應(yīng)用。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好做D-熒光素鉀鹽測(cè)試工作液是先用現(xiàn)配。
LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵。此后，通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué)，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理。
按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè)，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗?）對(duì)于檢測(cè)靈敏度要求特別高的實(shí)驗(yàn)，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí)，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS，因鈣鎂離子可能會(huì)抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會(huì)對(duì)熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測(cè)。7）為了您的安全和健康。D-熒光素也常用于身體的外部研究。
后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸；短期保存：4℃干燥避光長(zhǎng)期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。 D-熒光素有時(shí)候也叫游離酸。熒光pcr試劑
D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusoleariu'）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶，能夠催化同一熒光素底物，而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyrali'）。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。蘇州熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好