這是一種小分子(19kDa)單體酶,具有獨特的底物,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著***的應(yīng)用前景,為進一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項針對各種能量受體熒光基團的深入研究發(fā)現(xiàn),紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)。可將這些熒光基團添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進行活細胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng),即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個氨基酸的小標簽和一個更大,更精細的NanoLuc?亞基,LgBiT。這兩部分結(jié)構(gòu)互補結(jié)合,重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進行蛋白質(zhì)相互作用的測定;也可以和HiBiT一樣高,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎?宿遷體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期
GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術(shù)簡介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及對藥物的反應(yīng)。在藥效學(xué)評價方面,熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動物水平上進行長期療效跟蹤觀察。利用無創(chuàng)傷活題成像對哎細胞生長的檢測,可對哎癥治的好之前和過程中的哎細胞的變化進行實時觀測和評估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光,不需要激發(fā)光,但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素,約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內(nèi)的,約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。熒光素。gfp熒光質(zhì)粒D-熒光素鉀鹽運輸條件是4℃冰袋運輸。
我們將與LgBiT具有極強親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標簽,具有多種功能,例如當與基于CRIPSR的標簽一起使用時,可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。螢光素酶(英語:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。
Q:熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢?Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同時具有更寬的動態(tài)范圍,便于數(shù)值分析比較,不需要熒光顯微鏡,而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,同時由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進行失蹤定位,并且其觀測不需裂解細胞,方便進行適時觀察。Q:海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比,相對活性如何?在氧、鎂和ATP的存在下,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而來源于海洋腔腸(Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術(shù)(Dual-reporterassays),結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q:雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炥D(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因?轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善,首先要確保細胞狀態(tài)是好的,通常我們選出處于分裂期的細胞,另外陽性對照您可以選擇過表達的熒光蛋白質(zhì)粒,還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結(jié)果很靈敏,有一定差異是正常的,通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善,一是記住保持樣本的均一性。做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。
熒光素鈉[1],橙紅色粉末,無氣味,有吸濕性;易溶于水,溶液呈黃紅色,并帶極強的黃綠色熒光,酸化后消失,中和或堿化后又出現(xiàn),微溶于乙醇;比較大吸收波長(水)?;拘畔⑺幤访Q熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標準本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽。按干燥品計算,含C20H10Na2O5不得少于。類別診斷用藥。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱:熒光素鈉中文別名:熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱:FluoresceindisodiumsaltCAS號:518-47-8[2]熒光素鈉分子式:C20H10Na2O5分子量:等級:BSMDL號:MFCD00167039Beilstein號:3833041EC號:208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末;無臭,幾乎無味;有引濕性。本品在水中易溶,在乙醇中略溶。橙紅色粉末,無氣味,有吸濕性;易溶于水,溶液呈黃紅色,并帶極強的黃綠色熒光,酸化后消失,中和或堿化后又出現(xiàn),微溶于乙醇;比較大吸收波長(水)。4檢查資料編輯氯化物取本品,分取溶液10ml,依法檢查(附錄ⅧA),與標準氯化鈉溶液制成的對照液比較,不得更濃()。硫酸鹽取上述氯化物項下剩余的溶液25ml,依法檢查。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽試劑
D-熒光素鉀鹽檢測公司招代理嗎?宿遷體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期
按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期)后進行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號115144-35-9為準。2)注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3)如果要進行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,在進行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。5)對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時,應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測。7)為了您的安全和健康。宿遷體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期
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