上海相互作用蛋白檢測CoIP聯(lián)合質譜檢測

免疫共沉淀CoIP實驗，細胞的收集及裂解方法如下：

收集2E7個細胞樣品，加入PBS洗滌細胞，離心后棄上清收集細胞沉淀。

準備500μl預冷的CellLysisBuffer,分別加入5μlProteaseInhibitor、5μlPMSF，混勻后加進細胞沉淀中吹打均勻，冰上孵育30min，期間渦旋混勻幾次。

4℃,12000rpm離心10min，取上清，進行蛋白濃度測定及后續(xù)實驗。廣州基云生物，在IP互作組檢測和關鍵機制分子篩選驗證領域，具有豐富的經(jīng)驗，助力您的互作機制研究，歡迎垂詢合作。 IP-Mass技術是一種結合了免疫沉淀和質譜分析的方法。上海相互作用蛋白檢測CoIP聯(lián)合質譜檢測

免疫沉淀(IP)的原理及應用：

免過疫沉淀技術是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎，用于研究蛋白質相互作用、蛋白質與遺傳物質之間相互作用的經(jīng)典方法，可有效確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用，也是用于抗原檢測和純化的方法之一。CO-IP、CHIP、RIP等技術由IP演化而來。

原理:IP利用特定抗體與目標蛋白結合，將其從混合物中沉淀出來，實現(xiàn)蛋白的純化與鑒定。

作用:富集和檢測某單一蛋白。

應用:主要用于蛋白質-蛋白質相互作用研究，幫助分析蛋白質復合物的組成。IP側重于研究蛋白質復合物，適用于探究特定蛋白質的結合伙伴以及信號通路的研究。 CoIP-mass spectrometry檢測免疫共沉淀存在檢測局限、相互作用不確定、靈敏度不足等缺陷。

CoIP-Mass是一種檢測細胞內蛋白互作組的套餐技術。該技術通過聯(lián)合免疫共沉淀技術和質譜檢測技術，對目的蛋白在特定細胞/組織內的互作蛋白，進行系統(tǒng)的檢測和分析。該技術適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異研究。因此，該技術是研究細胞內蛋白互作調控網(wǎng)絡的常規(guī)前置技術。CoIP-WB是一種檢測細胞內蛋白互作的驗證技術。該技術通過聯(lián)合免疫共沉淀技術和WesternBlot蛋白檢測技術，對目的蛋白在特定細胞/組織內的互作關系進行探究，明確蛋白直接的相互作用關系。該技術適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作檢測驗證，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作差異研究。因此，該技術是研究細胞內蛋白互作調控網(wǎng)絡的常規(guī)檢測技術。

CoIP-Mass互作組驗證，即在互作組分析篩選的基礎上，進一步利用CoIP-WB技術對感興趣分子進行靶向檢測，更加精細，也是互作組驗證的必由之路。驗證成功上岸的基礎是理想的互作組數(shù)據(jù)庫和豐富的分析經(jīng)驗，方能事半功倍。廣州基云生物，在IP互作組檢測和關鍵機制分子篩選驗證領域，具有豐富的經(jīng)驗，您的互作機制研究。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是一種基于抗原與抗體特異性結合用于研究蛋白質與蛋白質相互作用的方法。常用于候選目標蛋白質之間是否有相互作用，也用于確定與已知蛋白質互作的其它未知蛋白質相互作用?；驹恚寒敿毎诜亲冃詶l件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。用蛋白質A的抗體免疫沉淀A，那么與A互作的蛋白質也能沉淀下來，此時獲得與A互作的蛋白復合物。若已知AB互作，則用蛋白復合物進行WB實驗檢測B；若鑒定蛋白復合物中有哪些蛋白，則對復合物進行質譜檢測。免疫共沉淀實驗流程：蛋白質樣本收集-A抗體沉淀目的蛋白A-SDS-PAGE分離-WB檢測B蛋白或者質譜鑒定互作蛋白。免疫共沉淀法證實蛋白互作，基于抗體專一性，揭示生理性相互作用。

IP-Mass（免疫沉淀-質譜）實驗流程主要包括以下步驟：樣品制備：收集細胞或組織樣品，并進行適當?shù)牧呀馓幚恚葬尫偶毎麅鹊牡鞍踪|。免疫沉淀：將特異性抗體與目標蛋白結合，形成抗原-抗體復合物。隨后，將復合物與固相載體（如磁珠）結合，通過洗滌步驟去除非特異性結合的雜質。洗脫：從固相載體上洗脫免疫沉淀得到的蛋白質復合物，以便進行后續(xù)的質譜分析。蛋白酶消化：將洗脫下來的蛋白質復合物進行蛋白酶消化，將其分解成小分子的肽段。質譜分析：將消化后的肽段進行質譜分析，通過測量肽段的質量和電荷信息，鑒定出蛋白質的種類和序列。數(shù)據(jù)分析：對質譜數(shù)據(jù)進行處理和分析，確定與目標蛋白相互作用的蛋白質，以及相互作用的可能性和強度。IP-Mass實驗流程結合了免疫沉淀的高特異性與質譜分析的高靈敏度，能夠準確地鑒定蛋白質相互作用，并為后續(xù)的功能研究和藥物開發(fā)提供有力支持。如何快速開展Co-IP實驗。中國香港免疫沉淀CoIP-mass spectrometry檢測

免疫共沉淀法可信度高，可發(fā)現(xiàn)新蛋白搭檔，但存局限，需結合其他方法驗證。上海相互作用蛋白檢測CoIP聯(lián)合質譜檢測

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）主要優(yōu)點在于，它所得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內的實際情況，因此所得到的結果具有較高的可信度。此外，這種技術還可以用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。然而，盡管免疫共沉淀具有這些優(yōu)點，但它也有一些局限性，如可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用，不能判斷直接互作還是間接互作等。因此，在使用免疫共沉淀技術時，需要綜合考慮其優(yōu)缺點，并結合其他實驗方法和技術來驗證和補充實驗結果。上海相互作用蛋白檢測CoIP聯(lián)合質譜檢測