天津蛋白蛋白互作檢測CoIP WB檢測

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到富集的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。IP-WB技術(shù)結(jié)合免疫沉淀與Western Blot，高特異、高靈敏驗證蛋白互作，支持功能研究與藥物開發(fā)！天津蛋白蛋白互作檢測CoIP WB檢測

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當用預(yù)先固化在agarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔?；プ鞯鞍讬z測CoIP-MassCo-IP外源檢測引入外源蛋白驗證互作，敏感度高但需嚴控條件，結(jié)合內(nèi)源檢測更準確！

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：

試驗設(shè)計：盡量進行試驗組別設(shè)計和進行生物學(xué)重復(fù)檢測，提高后續(xù)驗證的陽性率。常規(guī)過表達單組（AbIPvsIgGIP）；動態(tài)互作組學(xué)（實驗組vs對照組vsIg組）。根據(jù)目的設(shè)計適當?shù)纳飳W(xué)重復(fù)。如果后續(xù)以CoIP-Mass數(shù)據(jù)進行互作組標準分析，則需要3-4組生物學(xué)重復(fù)；如果后續(xù)以尋找關(guān)鍵互作蛋白，進行機制深入研究，則建議1-2次生物學(xué)重復(fù)。經(jīng)驗顯示單次重復(fù)假陽性率90%。

蛋白表達和細胞量：細胞用量要求大(2-10e7細胞量），建議不少于5e7（金標準：320g離心細胞量50μl，保障項目用量）。低表達蛋白，建議使用過表達組進行檢測。蛋白表達可根據(jù)WB結(jié)果或初步根據(jù)數(shù)據(jù)庫判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。

CoIP-Mass是一種檢測細胞內(nèi)蛋白互作組的套餐技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和質(zhì)譜檢測技術(shù)，對目的蛋白在特定細胞/組織內(nèi)的互作蛋白，進行系統(tǒng)的檢測和分析。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異研究。因此，該技術(shù)是研究細胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)前置技術(shù)。CoIP-WB是一種檢測細胞內(nèi)蛋白互作的驗證技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和WesternBlot蛋白檢測技術(shù)，對目的蛋白在特定細胞/組織內(nèi)的互作關(guān)系進行探究，明確蛋白直接的相互作用關(guān)系。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細胞/組織中的蛋白互作檢測驗證，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作差異研究。因此，該技術(shù)是研究細胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)檢測技術(shù)。IP-Mass技術(shù)結(jié)合免疫沉淀與質(zhì)譜分析，研究蛋白互作與差異，助力生物醫(yī)學(xué)研究！

Co-IP（免疫共沉淀）實驗操作的要點。1.細胞裂解：確保采用溫和的裂解條件，以保持細胞內(nèi)存在的蛋白間相互作用。使用非變性裂解液進行裂解和洗滌。2.抗體固定：選擇經(jīng)過驗證的抗體，以減少假陽性結(jié)果。注意抗體與緩沖液的比例，避免抗體稀釋過度或過多。3.抗體結(jié)合：將抗體與樣品混合，確?？贵w與目標蛋白充分結(jié)合。4.磁珠或瓊脂糖添加：將抗體固定的磁珠或瓊脂糖加入混合物中，使其與抗體-蛋白復(fù)合物結(jié)合。5.沉淀：通過磁珠或瓊脂糖的沉降，分離出蛋白復(fù)合物。6.洗脫：使用洗脫緩沖液將蛋白質(zhì)復(fù)合物從磁珠或瓊脂糖上洗脫下來。7.增加洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入Triton X-100，以降低非特異性結(jié)合。遵循這些操作要點，可以確保Co-IP實驗的準確性和可靠性，從而得到準確的蛋白質(zhì)相互作用結(jié)果。免疫共沉淀實驗：樣品處理、抗體處理、共沉淀、洗滌及鑒定，一氣呵成！河南互作蛋白檢測CoIP WB檢測

Co-IP技術(shù)利用抗原抗體結(jié)合，研究蛋白質(zhì)互作，揭示其功能機制的有力工具！天津蛋白蛋白互作檢測CoIP WB檢測

Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，特別是在蛋白質(zhì)相互作用、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、疾病機制等方面。因此，許多從事這些領(lǐng)域的研究人員都在使用Co-IP技術(shù)。以下人員可能會使用Co-IP技術(shù)。生物醫(yī)學(xué)研究人員：在研究疾病的發(fā)生機制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)等方面，經(jīng)常利用Co-IP技術(shù)來驗證和發(fā)現(xiàn)新的分子機制。藥物研發(fā)人員：在藥物研發(fā)過程中，通過Co-IP技術(shù)來鑒定和驗證藥物與特定蛋白質(zhì)相互作用的分子機制，以評估候選藥物的有效性和選擇性。蛋白質(zhì)組學(xué)研究人員：利用Co-IP技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜分析，對蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)進行高通量鑒定和分析，揭示蛋白質(zhì)在生命過程中的功能和調(diào)控機制?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)研究人員：在研究細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域時，也會使用Co-IP技術(shù)來探索蛋白質(zhì)之間的相互作用和調(diào)控關(guān)系。天津蛋白蛋白互作檢測CoIP WB檢測