上海蛋白純化試劑純化流程

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-10-23

rProteinA/GBeads4FF是將rProteinA/G高密度定向偶聯(lián)到高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠微球表面,該產(chǎn)品具有更高的抗體結(jié)合能力和較低的蛋白非特異吸附率,洗脫條件更均一,一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。產(chǎn)品性能見表1。本產(chǎn)品主要用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究,也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。用戶可根據(jù)目標(biāo)抗體的種屬來源及亞型選擇微球的類別,純化流程本產(chǎn)品主要應(yīng)用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究。2.1緩沖液的準(zhǔn)備所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22μm或0.45μm濾膜過濾。平衡/洗雜液:0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0洗脫液:0.1M甘氨酸,pH3.0中和液:1MTris-HCl,pH8.5交聯(lián)液:0.2M三乙醇胺,pH8.2交聯(lián)劑:DMP(dimetylpimelimidatedihydrochloride)終止液:50mMTris,pH7.5常見的蛋白質(zhì)分離純化方法。上海蛋白純化試劑純化流程

蛋白純化試劑,抗體純化產(chǎn)品rProtein G Beads 4FF是用于分離和純化lgG的親和層析介質(zhì),具體性能見表1。Protein G是一種分離自G Streptococci的細(xì)胞壁蛋白,它可通過其Fc片段結(jié)合哺乳動(dòng)物IgG。重組protein G含有高親和結(jié)合位點(diǎn),減少了非特異性吸附。Protein G和Protein A有不同的lgG結(jié)合特性,相比Protein A, Protein G對牛、羊、馬等多克隆抗體有更強(qiáng)的結(jié)合力,它還可以結(jié)合不能與Protein A很好結(jié)合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1,具體結(jié)合能力見表2。rProtein G Beads 4FF是以高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),可以在相對較高的流速下進(jìn)行單克隆抗體和多克隆抗體的純化。安徽磁珠系列試劑代理銷售價(jià)格預(yù)制膠使用電泳槽如何操作?

蛋白純化試劑抗體純化rProtein A/G Beads 4FF純化流程,樣品準(zhǔn)備上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值,可以用平衡/洗雜液對血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋,或者樣品用平衡/洗雜液透析。對于100mm培養(yǎng)皿中的貼壁細(xì)胞,吸除細(xì)胞培養(yǎng)液,使用預(yù)冷PBS洗滌一次后加入2ml細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞。對于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞后,PBS洗滌一次后參考貼壁細(xì)胞的裂解方法進(jìn)行裂解。植物或動(dòng)物組織樣品可以使用液氮研磨方法裂解。具體的裂解方法請參考不同裂解液的使用說明,裂解液**終總蛋白濃度選擇在0.5-1μg/μl范圍內(nèi)較為合適。通常針對目標(biāo)蛋白的表達(dá)量不同,需要對總蛋白濃度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整。2.3.去除非特異性結(jié)合(可省略)1)取200微升至1毫升蛋白樣品,加入約1微克和免疫沉淀時(shí)使用的IgG種屬相同的3/5常州天地人和生物科技有限公司NormalIgG和20微升充分重懸的rProteinA/GBeads4FF,4℃緩慢搖動(dòng)30分鐘。2)2500rpm(約1000g)離心1分鐘,取上清用于后續(xù)的免疫沉淀。注:哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)有多種成分可以和IgG發(fā)生結(jié)合,可能會(huì)在后續(xù)免疫印跡中出現(xiàn)非特異性條帶。使用normalIgG和rProteinA/GBeads4FF對裂解液預(yù)處理可以降低非特異性吸附。

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隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學(xué)的各種試驗(yàn)技術(shù),并研制成套試劑盒,使基因克隆表達(dá)變得越來越容易lIl。但分子生物學(xué)的上游工作往往并非是**終目的,分子克隆與表達(dá)的關(guān)鍵是要拿到純的表達(dá)產(chǎn)物,以研究其生物學(xué)作用,或者大量生產(chǎn)出可用于疾病***的生物制品。相對與上游工作來說,分子克隆的下游工作顯得更難,蛋白純化工作非常復(fù)雜,除了要保證純度外,蛋白產(chǎn)品還必須保持其生物學(xué)活性。純化工藝必須能夠每次都能產(chǎn)生相同數(shù)量和質(zhì)量的蛋白,重復(fù)性良好。這就要求應(yīng)用適應(yīng)性非常強(qiáng)的方法而不是用能得到純蛋白的比較好方法去純化蛋白。在實(shí)驗(yàn)室條件下的好方法卻可能在大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用中失敗,因?yàn)楹笳咭笠?guī)?;以诿咳盏膽?yīng)用中要有很好的重復(fù)性,上海楚知為您提供質(zhì)量的蛋白純化試劑上海蛋白純化試劑純化流程

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